【摘要】： 免疫相关的肝损伤参与多种肝病发生。刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)所致小鼠肝炎(CIH)是研究免疫性肝损伤发生机制及药物筛选的经典模型之一。 脂氧素(lipoxin, LX)是花生四烯酸代谢经脂加氧酶途径生成的代谢产物,具有抗炎、促炎症消退等功效。近年发现,LX也具有免疫调节功能。BML-111是人工合成的脂氧素受体激动剂,其保留了LXA4功能所必需的重要基团。体内外实验证实,BML-111具有多种生物学效应,但尚未见将其应用于治疗免疫性肝损伤的报道。 本课题研究目标为：建立ConA诱导的小鼠肝损伤模型,观察BML-111对肝损伤的保护作用,并探讨该效应的机制。 (一)实验分组 *PBS对照组：尾静脉注射PBS(同ConA注射量)。 *ConA对照组：PBS稀释ConA贮液至合适的工作浓度,尾静脉注射,动物半致死剂量为25μg／g体重,其他为15μg／g体重。 *BML-111对照组：PBS稀释BML-111贮液至合适工作浓度,按1μg／g进行腹腔注射。 *BML-111治疗组：BML-111(1μg/g)腹腔注射；约半小时后尾静脉注射ConA(剂量同ConA组)。 (二)BML-111对ConA所致小鼠肝损伤的影响 1.血清转氨酶(ALT)检测：与PBS对照组相比,BML-111组ALT水平无差异,而ConA组ALT水平明显升高；与ConA组相比,BML-111治疗组ALT水平显著降低。 2.组织学检测 (1)HE染色结果：PBS组和BML-111组肝组织结构完整；ConA组肝组织大片坏死和大面积肝细胞变性,红细胞和炎性细胞浸润；BML-111治疗组可见点状坏死区,以肝细胞变性为主,可见红细胞和炎性细胞浸润。 (2)TUNEL检测结果：PBS组和BML-111组未见凋亡病灶；ConA组可见大片细胞凋亡区；BML-111治疗组可见点状分布的凋亡细胞。 (三)BML-111对小鼠存活时间的影响给予半致死剂量ConA,与ConA组相比,BML-111治疗组可显著提高小鼠存活率。 结论：上述研究结果显示,BML-111自身对肝脏没有毒性；BML-111对ConA所致小鼠肝损伤具有保护效应。 (一)实验分组 *PBS对照组：尾静脉注射PBS(同ConA注射量)。 *ConA对照组：PBS稀释ConA贮液至合适工作浓度,按15μg/g／g体重进行尾静脉注射。 *BML-111对照组：PBS稀释BML-111贮液至合适工作浓度,按1μg/g剂量进行腹腔注射。 *BML-111治疗组：BML-111(1μg/g)腹腔注射：约半小时后尾静脉注射ConA(同ConA注射量)。 (二)BML-111保护ConA所致小鼠肝损伤的效应机制 1.肝组织匀浆总SOD、MDA检测：与ConA组相比,BML-111治疗组能显著提高肝组织总SOD、降低MDA水平。 2.肝组织匀浆MPO检测：与ConA组相比,BML-111治疗组能显著降低MPO水平。 3.血清细胞因子检测：与PBS对照组相比,BML-111对照组血清TNF-a、IFN-γ水平无差异；BML-111与ConA组相比,BML-111治疗组能显著降低血清TNF-a水平,但对IFN-γ水平无影响。 4.肝组织EMSA检测NF-κB:与PBS组相比,ConA组NF-κB活性升高；与ConA组相比,BML-111治疗组NF-κB活性明显降低。 5.肝组织淋巴细胞亚群检测：PBS组、BML-111组、ConA组和BML-111治疗组NK细胞、NKT细胞及T细胞所占总细胞比例无明显差异。 6.肝组织活化T细胞比例：PBS组、BML-111组、ConA组和BML-111治疗组活化T细胞(CD3+CD69+)比例无差异。 结论：BML-111保护ConA所致肝组织的机制可能为：抗氧化损伤；减少中性粒细胞浸润；抑制NF-κB活化及血清TNF-α水平；对血清IFN-γ水平及淋巴细胞亚群比例及T细胞活化无影响。 (一)实验分组 分为空白组、BML-111组(1μg／ml)、ConA组(巨噬细胞：10μg／ml；T细胞：5μg／ml)、BML-111+ConA组。 (二)BML-111对ConA所致巨噬细胞活化的影响 BML-111能明显降低ConA诱导巨噬细胞所分泌TNF-α、Rantes水平。 (三)BML-111对ConA所致T细胞活化的影响 通过检测细胞培养上清IFN-γ水平和T细胞表面CD69、CD25表达,发现BML-111对ConA所致T细胞活化无影响。 结论：BML-111能显著降低ConA所致巨噬细胞活化,而对ConA所致的T细胞活化无影响。 1.BML-111能显著抑制ConA所致小鼠肝损伤。 2.BML-111的保护效应与其抗氧化、抑制中性粒细胞浸润、抑制NF-KB活化和降低血清TNF-a水平相关,但不影响血清IFN-γ水平、淋巴细胞亚群比例及T细胞活化。 3.BML-111能显著影响ConA所致巨噬细胞活化,而对ConA所致T细胞活化无影响。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575
【图文】：
实验结果ML一111能抑制conA诱导的小鼠肝损伤.血清转氨酶ALT活性细胞内含丰富的转氨酶(如ALT)，肝细胞破坏后被释放入血，检测映肝细胞损伤程度。小鼠经不同处理12小时后，检测血清转氨酶A图所示:与PBs组相比，BML一nl单独作用组对血清转氨酶ALT无n=6一8);与CO叭组相比，BML一111治疗组血清转氨酶ALT下降性(*P<0.05，n=6一8)。
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【参考文献】
相关期刊论文 前8条
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本文编号：
2800748
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