液质联用技术在糖耐量受损和肝硬化研究中的应用

发布时间：2020-09-04 08:24

　　本文基于液相色谱-三级四极杆串联质谱(HPLC-DAD-MS/MS)技术,建立了同时定量糖耐量受损(IGT)患者血清中9种嘌呤嘧啶代谢物和肝硬化患者尿样中17种嘌呤嘧啶代谢物的方法。在定量分析的基础上对糖耐量受损患者横断面及给药前后数据进行了统计分析,同时也对肝硬化患者嘌呤嘧啶代谢横断面数据进行了统计分析并找出了5种与肝硬化相关的差异性代谢物。从定量代谢组学的角度阐述了嘌呤嘧啶代谢紊乱与糖耐量受损和肝硬化的相关性,为疾病的早期诊断及相关机理研究开创了新途径。 IGT是介于正常糖耐量与糖尿病之间的一种中间状态。在本课题组前期对糖尿病及糖尿病肾病研究的基础上,选取可能与糖尿病发生发展相关性较大的9种关键代谢物,首先应用HPLC-DAD-MS/MS技术建立了同时定量糖耐量受损患者血清中9种嘌呤嘧啶代谢物的方法,然后通过对横断面数据的分析找出了尿酸、黄嘌呤、肌酐等3种与糖耐量受损相关的差异代谢物,最后应用化学计量学主成分分析法(PCA)就IGT患者在天芪降糖胶囊给药前后的差异进行了对比分析和疗效评判。肝硬化在我国是一种常见的恶性慢性疾病,是很多慢性肝病特别是病毒性肝炎发展到晚期的结果,同时也是主要死亡病因之一。基于肝硬化患者与嘌呤嘧啶代谢紊乱的相关性,以HPLC-DAD-MS/MS联用技术为主要分析手段,建立了同时定量肝硬化患者尿液中17种嘌呤嘧啶代谢物的方法。通过横断面、Child-Pugh肝功能分级、中医辨证分型等3个层次的对比分析进一步揭示了肝硬化与嘌呤嘧啶代谢的相关性,找出了5种(尿酸、黄嘌呤、次黄嘌呤、黄苷和肌苷)差异性较明显的代谢物并探讨了其生物意义,为疾病的诊断、病情监测及研究提供了参考。
【学位单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：

色谱图,色谱图,正离子,离子化

其他化合物在正离子模式下的离子化效率优于在负离子模式下的离子化效率，所以质谱检测选用正离子模式。在正离子模式下相关的仪器参数如电离电压、离子源温度、碰撞气、雾化气、气帘气及辅助干燥气等亦均进行了优化。图2.2是几种化合物的紫外全波长扫描图，其中次黄嘿吟、尿普紫外扫描图与黄嘿吟相似，在255一265nm处有最大吸收。在条件达到最优后的色谱及质谱图见图2.3。

色谱图,紫外,样本,离子

图2.4是一个正常样本和一个IGT患者的紫外色谱图和提取离子质谱图的对比分析图，从图中可以很明显的看出黄嗓吟、尿酸等含量有不同程度的变化。尿酸在正常人中的峰宽和峰高均大于IGT患者，而正常人中黄嘿吟的峰高则明显低于IGT患者，其他代谢物的峰高和峰宽从图中很难看出有明显变化。 51015为乃 30355呀 01520全 53035图2.4正常对照组和IGT组样本的紫外图和提取离子图(a)正常样本紫外图;(b)正常样本提取离子流图 ;(c)IGT样本紫外图;(d)IGT样本提取离子流图 Fig.2.4UVandmultiPleextractedionehromatogramsofcontrolsubjeetandIGTPatieni(a)UVehromatogr田旧ofaeontrolsubjeet:(b)multiPleextractedionehromatogr田爪sofaeontrolsubjeet: (c)UVchromatograJ旧 ofaIGTPatieni:(d)multiPleextraetedionehromatogr田旧 5ofaIGTPatient此外，以exeel为统计工具，统计结果以x士、表示，组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析，由方差齐性检验结果选择方差齐或不齐。对正常对照组和IGT组所有化合物的含量进行统计分析，各个化合物的含量结果见表2.5。

柱状图,尿酸

图2.5尿酸、黄嚓吟和肌配在各组之间的水平对比 Fig.2.5ComParisonofurieacid， xanthineandcreatinineamongthegrouPs图2.5是三种差异代谢物在对照组和IGT组之间的含量变化柱状图。通过t检验发现，各个代谢物在正常对照组和IGT组之间均存在显著性差异(尸<0.05)，其中尤以尿酸和黄嚓吟的变化较为显著(P<0.01)。尿酸在机体内能作为一种还原性物质，在参与氧化还原反应上具有抗氧化、抗DNA损伤等有益作用;然而，它同时也能促进血管平滑肌增生，导致内皮功能紊乱等有害作用[70]。一般来讲，正常人空腹血尿酸水平是受血肌配水平和空腹甘油三酷浓度决定的。研究表明，尿酸与低肾脏血流相关，能使血管收缩降低

【参考文献】