Caveolin-1在肺纤维化中的表达及意义

发布时间：2020-09-07 18:33

　　第一部分:特发性肺纤维化患者肺组织窖蛋白-1、胶原-Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白的变化及意义目的通过比较特发性肺纤维化( Idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者和正常对照组的肺组织的窖蛋白-1(Cav-1) mRNA和蛋白表达,肌成纤维细胞表达标志物α-平滑肌肌动蛋白(α- smooth muscle actin,α-SMA)、细胞外基质产物:胶原-Ⅰ蛋白表达的变化,初步探讨Cav-1与特发性肺纤维化之间的关系。方法 6例特发性肺纤维化患者肺组织标本通过常规开胸肺活检获得,IPF以普通型间质性肺炎(UIP)为IPF的病理特征,表现为弥漫的间质纤维化,仅轻度的间质炎症,伴蜂窝变区和成纤维细胞灶的出现;对照组肺标本6例,来自因孤立肺结节而行肺叶切除的肺癌患者。免疫组织化学方法观察Cav-1表达差异,并通过测定肌成纤维细胞标志物α-SMA表达情况,观察Cav-1变化与细胞表型之间的关系。提取IPF患者肺组织和对照组肺组织的总RNA,经RT-PCR观察Cav-1 mRNA,Western-Blot法检测Cav-1、胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白的表达变化。结果 IPF患者肺组织Cav-1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低,分别为(0.05±0.018 vs 0.65±0.19)和(0.16±0.05 vs 0.81±0.10)(P0.05)。与对照组相比,IPF患者肺组织胶原-Ⅰ( 0.85±0.109 vs 0.16±0.045)和α-SMA蛋白(0.78±0.084 vs 0.14±0.053)表达明显增多(P0.05)。结论 IPF患者肺组织Cav-1的mRNA和蛋白表达明显减少,而胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达增多,提示Cav-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关。第二部分:转换生长因子-β1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响目的通过研究转换生长因子-β1对人胚肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblasts,以下均简称成纤维细胞)的窖蛋白-1(Cav-1)及细胞外基质表达的影响,为寻找治疗肺间质纤维化的寻找新的作用靶点。方法体外培养成纤维细胞,以未加TGF-β1的成纤维细胞为对照组,每组3个细胞。分别以不同终浓度(2μg/L、5μg/L和10μg/L)TGF-β1处理的成纤维细胞为实验组,每组至少需5*108细胞,重复3次,提取细胞的总RNA和蛋白,用RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度TGF-β1刺激3、6、12和24 h后各组成纤维细胞Cav-1的mRNA及Cav-1、胶原-Ⅰ和α-SMA的蛋白表达。结果 TGF-β1作用成纤维细胞后, Cav-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系。TGF-β1作用12 h,5μg/L剂量组,Cav-1的mRNA和蛋白表达积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P0.01);TGF-β1作用24 h,5μg/L剂量组胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P0.01);相关分析结果显示,成纤维细胞Cav-1的蛋白表达下调与胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达上调呈显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P0.05)。结论 TGF-β1可下调成纤维细胞Cav-1 mRNA和蛋白表达,并与胶原-Ⅰ和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示成纤维细胞Cav-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：

肺组织,患者,对照组,净密度

目的蛋白净密度/GAPDH净密度值之比表示目的蛋白的本量为3例。数据统计处理-PCR、Western Blot实验重复 3次，数据用均数 ±标准差 (xPSS17.0统计软件进行分析，组间均值比较采用单因素方.05认为具有统计学差异，以P<0.01认为具有显着性差异结果IPF患者肺组织Cav-1 mRNA和蛋白表达明显降低IPF 患者肺组织表达 Cav-1 mRNA 较对照组相比，表达明6±0.1921 vs 0.0502±0.01821) (p<0.05)。（图 1a、 1b）

肺组织,患者,蛋白表达,对照组

、Western Blot实验重复 3次，数据用均数 ±标准差 (x7.0统计软件进行分析，组间均值比较采用单因素方为具有统计学差异，以P<0.01认为具有显着性差异结果患者肺组织Cav-1 mRNA和蛋白表达明显降者肺组织表达 Cav-1 mRNA 较对照组相比，表达明.1921 vs 0.0502±0.01821) (p<0.05)。（图 1a、 1b）-1 mRNA 在 IPF 患者和对照组肺组织的表达

肺组织,上皮细胞,蛋白,患者

图 2a：Cav-1 蛋白在 IPF 患者和对照组肺组织的表达图 2b：Cav-1 蛋白在 IPF 患者和对照组肺组织的表达差异与对照组肺组织比较（图3a），IPF患者肺组织中上皮细胞的Cav-1蛋白表达下降（图3b）；另外，我们注意到，在成纤维细胞灶内的α-SMA阳性（图3c）的肌成纤维细胞无Cav-1的表达（图3d）。图3a 正常对照组肺组织上皮细胞的表达cav-1蛋白图3b IPF患者肺组织中上皮细胞的cav-1蛋白表达下降22

【参考文献】