HIV-1单纯及合并HCV感染者的HIV-1特异性细胞免疫应答研究

发布时间：2020-09-09 16:58

　　 近年来获得性免疫缺陷综合征(AIDS)已成为严重危害全人类健康的传染病之一,人们对其研究也逐渐深入。在整个控制HIV/AIDS进展的机体免疫过程中,细胞免疫始终占据主导的地位,其中病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答最为关键。在对CTL应答反应的研究中,较多地采用酶联免疫斑点吸附实验( ELISPOT )检测技术,将CTL应答的强度量化,这些研究都是利用单个细胞的单个斑点的形成来对干扰素-γ(IFN-γ)的分泌细胞进行定量,并将此数量的多少直接等价于CTL应答强度(频数)的高低。但是我们知道并非所有的CTL都分泌IFN-γ,而且除了CD8~+T细胞之外,CD4~+T细胞和非特异细胞(如NK细胞)也释放IFN-γ,这些因素都会对斑点形成细胞(SFC)的数量产生影响,进而影响到对CTL应答强度(频数)的判断。而且既往对HIV-1特异性CD4~+和CD8~+T细胞应答在对抗HIV-1方面的研究采用的标本多为人外周血单个核细胞(PBMC) ,尽管国外有少量直接针对HIV-1特异性CD4~+和CD8~+T细胞反应的研究,但在中国人群中缺乏研究报道,因此展开这方面的研究是很有必要的。 本研究选取中国HIV-1单纯感染者26例,HIV-1/HCV合并感染者23例为研究对象,采用免疫磁珠分选技术,从研究对象的PBMC中分选出CD4~+T及CD8~+T细胞,然后采用ELISPOT,以HIV-1 P24编码区的氨基酸序列人工合成的12个重叠肽段组成的肽段库作为特异性抗原表位,对研究对象的CD4~+、CD8~+T细胞及PBMC的IFN-γ分泌细胞频数进行测定,分析比较CD4~+和CD8~+T淋巴细胞对特异性细胞免疫应答的影响。同时采用了酶联免疫吸附法(ELISA)检测了研究对象血浆中IFN-γ、白细胞介素( IL )-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21的浓度,分析这些细胞因子与HIV-1、HCV感染的关系。 主要研究内容和结果如下: 1.在对接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的26例单纯HIV-1感染者和23例HIV-1/HCV合并感染者的HIV-1抗原特异性CD4~+T、CD8~+T细胞免疫应答的研究中发现,单纯HIV-1感染者的HIV-1抗原特异性CD4~+T细胞应答频数显著低于CD8~+T细胞( F=4.592 , P=0.037 )及PBMC ( F=5.436 , P=0.025 )的应答频数,但是HIV-1抗原特异性CD8~+T细胞应答频数与PBMC相比,差异无显著性( F=0.001 , P=0.970 )。HIV/HCV合并感染者的HIV-1抗原特异性CD4~+T细胞( Z= -2.432 , P=0.015 )、CD8~+T细胞( Z= -1.996 , P=0.046 )及PBMC ( Z= -2.306 , P=0.021 )的应答频数显著低于单纯HIV-1感染者。 2.对所有研究对象全血中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞数与HIV-1特异性细胞免疫应答的相关性研究中发现,单纯HIV-1感染者和HIV/HCV合并感染者的HIV-1抗原特异性CD4~+T、CD8~+T细胞及PBMC应答频数与全血中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞数均无相关性。 3.对单纯HIV-1感染组及HIV-1/HCV合并感染组血浆中病毒载量进行检测,发现:单纯感染组组内病毒载量小于40拷贝/mL的病例的HIV-1抗原特异性CD4~+T、CD8~+T细胞及PBMC应答频数高于病毒载量大于40拷贝/mL的病例,但是差异无显著性(P=0.166 , 0.187, 0.400 );在病毒载量小于40拷贝/mL时,单纯感染组的HIV-1抗原特异性细胞免疫应答频数显著高于合并感染组( P=0.006, P=0.026, P=0.021),而病毒载量大于40拷贝/mL时,两组组间差异无显著性( P=0.268, P=0.376 , P=0.507 )。 4.对HIV-1单纯感染组、HIV-1/ HCV合并感染组及正常对照组血浆中细胞因子IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21、IFN-γ的浓度的检测后发现,HIV-1单纯感染组及HIV-1/HCV合并感染组两组间血浆中上述细胞因子的浓度差异无显著性,但是此两组研究对象血浆中IL-4、IL-12及IFN-γ的浓度显著高于正常对照组(P均为0.000),IL-6、IL-21的浓度则显著低于正常对照组( P均为0.000 ),单纯感染组IL-7浓度显著高于正常对照组(P=0.049),合并感染组IL-7浓度高于正常对照组,但是差异不具有显著性(P=0.365)。 结论: 1.在HIV-1感染中,体内存在有HIV-1特异性CD4~+T细胞应答,但是其作用强度小于HIV-1特异性CD8~+T细胞; 2.在HIV-1 /HCV合并感染中,HCV能下调机体对HIV-1特异性细胞应答强度,这是否为合并感染者HAART治疗疗效差的原因之一有待更进一步证实; 3. HIV-1感染对人体内的IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21和IFN-γ的分泌水平影响显著,而HCV合并感染未能使上述细胞因子水平产生进一步显著变化。
【学位单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R512.91;R512.6
【部分图文】：

1.2 中国艾滋病流行现状我国自 1985 年发现首例艾滋病病毒感染者以来，艾滋病在我国流行经历了三个阶段：1985 年 ~ 1988 年为第一阶段，即传入期，这一阶段的感染者主要为外来者，4 年报告总数为 22 例；1989 年 ~ 1993 年为第二阶段，即播散期，1989年 10 月在云南西南地区吸毒人群中发现了 146 例 HIV 感染者标志此期的开始。在此期间，大多数 HIV 感染报道来源于云南的注射毒品者，这一阶段共报告病例 1221 例；1994 年 ~ 现在为第三阶段，即增长期，HIV 传播超出云南省的范围，全国 HIV 感染报告数量急剧上升，在四川（1995 年）、新疆（1996 年）、广西（1997 年）的吸毒人群中发现了大量的 HIV 感染者。截至 2009 年 10 月 31日，我国累计报告艾滋病病毒感染者和病人 319877 例，其中艾滋病病人 102323例，报告死亡 49845 例，估计 2009 年新发艾滋病病毒感染者 4.8 万人，性传播图1 AIDS全球流行现状

2.3 HIV-1 编码的蛋白组特异性抗原基因 ( group-specific antigen gene , gag ) 编码病毒的核心蛋白，翻译时先形成一个分子量为 55kD 的前体蛋白，随后在蛋白酶的作用下被裂解为pol图3 HIV-1基因组5′LTRgagvifvprvpu / vpxtatenvrevnef3′LTR图2 HIV-1病毒颗粒

+T细胞纯度的检测图1a. 免疫磁珠分选后流式细胞仪检测CD4+T细胞纯度0.62%99.38%图1b. 免疫磁珠分选后流式细胞仪检测CD8+T细胞纯度98.74%1.26%

【共引文献】

相关期刊论文 前2条

1 金磊;赵清霞;张政;福军亮;何云;姚金霞;王福生;;HAART治疗HIV-1慢性感染儿童外周血特异性CTL的反应特点[J];解放军医学杂志;2007年02期

2 ;Characteristics of HIV-1-specific CD8 T-cell responses and their role in loss of viremia in children chronically infected with HIV-1 undergoing highly active antiretroviral therapy[J];Chinese Medical Journal;2006年23期

相关博士学位论文 前1条

1 朱卫军;基于痘苗病毒天坛株的改良载体的研究及HIV-1疫苗的构建[D];武汉大学;2006年

相关硕士学位论文 前2条

1 赵稳;HIV-1抗原特异性CTL免疫应答影响因素的研究[D];广州医学院;2010年

2 查庆兵;健康HLA-A2～+供者HCMV特异性CTL的频率及其表型和功能分析[D];暨南大学;2006年

本文编号：2815234