HP感染者胃粘膜TLR2和TLR5的表达及意义

发布时间：2020-09-23 08:18

　　背景与目的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是螺旋状、微需氧的革兰氏阴性细菌,定植在胃上皮细胞和胃粘膜层。研究表明:约50%的世界人口感染有HP,尽管这些感染者中的大多数没有症状,但HP的长期感染明显增加消化性溃疡和远端胃腺癌发生的危险。已有越来越多的证据表明HP是慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌和胃粘膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤的重要致病因素。因此,深入探讨HP的致病机制对寻求更新、更好的治疗靶点有重要意义。研究表明HP感染后患者胃粘膜中炎症细胞因子TNF-α、IL-8、IFN-γ等和非感染患者相比显著增加,并且认为这些炎性细胞因子的增高和HP激活核因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)有关。然而,启动细菌与受体相互作用并激活下游信号事件的受体并未完全阐明。 Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一类进化上高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白家族,通过识别微生物成分在宿主第一线防御中起重要作用。TLRs识别表达于病原体上保守的与致病相关的分子—病原相关分子模式(pathogen associatedmolecular pattern,PAMP)。TLRs通过识别PAMP激活NF-κB、活化蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)等,启动一系列的炎症信号转导的级联反应,诱发炎症反应,引起宿主主动和被动免疫,在机体抗感染免疫中发挥重要作用。研究表明表达于胃上皮细胞系的TLR2、TLR5对HP激活NF-κB是必需的,已经证实TLRs基因表达的差异与感染的临床结局有关,以往多以人胃上皮细胞AGS细胞系、胃癌MKN45细胞系及荷兰猪胃小凹细胞表达的TLRs做为研究对象。至今鲜有TLR2、TLR5在人胃粘膜上皮细胞表达情况的文献报道。故本实验应用SYBR GreenⅠ实时逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR)方法,半定量检测12例HP感染患者和12例非HP感染患者的胃粘膜组织中TLR2mRNA及TLR5mRNA的表达,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参照;采用S-P免疫组织化学染色检测35例HP感染患者和33例非HP感染患者胃粘膜组织中TLR5蛋白的表达水平。本研究的目的是检测HP感染患者胃粘膜组织中TLR2及TLR5的表达情况及临床病理意义,并分析其与HP感染之间的关系及可能机制。材料和方法 HP感染患者胃镜活检标本(实验组)35例,非HP感染患者胃镜活检标本(对照组)33例,取自郑州大学第一附属医院消化内镜室2008年8月至10月间行电子胃镜检查患者活检标本。均经~(14)C呼气试验和快速尿素酶试验证实。标本取出后迅速置于液氮冷冻待用。按天根生物公司提供的RNAprep pure Tissue Kit试剂盒操作程序分别抽提实验组、对照组活检组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的28S和18S比例,以评估总RNA的完整性;用分光光度计在260/280nm测定总RNA吸光度,以计算总RNA的纯度;按天根生物公司提供的RealMasterMix(SYBR Green)试剂盒操作程序进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PER。ABI 7700荧光定量PCR仪自动生成Ct值和熔解曲线,扩增产物进一步用2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。活检标本采用SP法进行免疫组织化学检测,由两位观察者在双盲条件下对结果进行评判,用显微扫描成像系统拍照、储存图片。 mRNA相对定量采用比较Ct法(ΔΔCt法);计数资料采用x~2检验;计量资料采用t检验;以a=0.05为检验水准;统计分析采用SPSS10.0软件。结果 1.TLR5mRNA在实验组和对照组均有表达,实验组TLR5mRNA表达水平明显低于对照组,相对表达量是对照组的0.5倍,差异有统计学意义(P＜0.05)。 2.TLR2mRNA在实验组和对照组均有表达,两组间TLR2mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。 3.实验组35例患者中有21例TLR5蛋白呈阳性表达,阳性率为60%;对照组中有28例表达为阳性,阳性率为84.8%,两者差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 1.胃粘膜上皮细胞在mRNA水平表达有TLR2和TLR5,故表达于胃上皮细胞的TLRs可能和HP相互作用,引起胃粘膜的炎症,造成靶器官的损害。 2.在mRNA和蛋白水平,HP感染可下调胃粘膜上皮细胞TLR5的表达,可能是HP感染长期存在的原因之一。 3.TLR2可能在机体对HP感染的免疫反应中不起主要作用。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R573
【部分图文】：

褐色,胞质

TLRS在胃粘膜组织中的表达:阳性细胞定位于胞膜和/或胞质中，呈棕黄褐色(图A:SP

【参考文献】