固有免疫细胞在肝脏损伤和再生中的效应机制

发布时间：2020-10-13 02:38

　　 肝脏是机体最大的消化器官，承担着分泌胆汁、合成涉及生命活动中重要蛋白质和解毒功能。与其它器官不同，肝脏具有肝动脉和门静脉两套血液供应途径，鉴于这种特殊的解剖学位置和功能，肝脏一直暴露于大量的肠道来源的抗原物质，包括病原菌、毒素、肿瘤细胞和细菌代谢产物以及无害的食物抗原，这样就决定了肝脏不仅承担着“内部血液过滤”的作用，同时还“肩负”清除肠道来源的外来物质的重任。所以人们推测肝脏必须拥有一套快速选择性的反应机制去应对这些肝脏特异性潜在“危险信号”。固有免疫反应作为入侵病原菌的一线防御机制，以及局部免疫反应机制在应对各种各样的免疫挑战中的作用备受青睐。已知肝脏是细胞因子、补体和急性期反应蛋白这类可溶性分子的合成部位，而且还有大量的吞噬细胞、抗原提呈细胞以及淋巴细胞。根据肝脏高比例的固有免疫细胞(主要指Kupffer细胞、NKT细胞和NK细胞)和它们对肝脏外源刺激的快速反应能力，肝脏被定义为具有固有免疫特性的器官已经被多家研究结果所支持，因此，通过结合“肝脏学”和“免疫学”，一门新型学科“肝脏免疫学”应运而生。大量资料研究显示肝脏积聚的这些固有免疫细胞在肝脏的免疫监视功能中发挥重要作用，譬如抗病毒、抗寄生虫和抗细菌感染。然而过度的免疫细胞活化有时可能对肝细胞进行意想不到的自身攻击，引起自身免疫性的肝脏损伤。本研究旨在探索固有免疫反应在肝脏免疫损伤和肝脏再生中的作用，主要试图回答以下三个科学问题：建立新型NK细胞介导的小鼠肝炎模型，推动NK细胞在自身免疫性肝病中作用机制的深入研究；深入了解NK细胞在ConA诱导的肝脏损伤的作用；肝脏固有免疫细胞对肝脏再生的调节机制，特别是探讨HBV感染是如何通过固有免疫反应途径来负调节小鼠肝脏再生。本研究获得的主要结果大致分为以下四个部分： 新型NK细胞介导、TLR3激动剂诱导的肝炎模型的建立：目前，T细胞、NKT细胞和巨噬细胞在自身免疫性肝炎中的作用研究甚多，相应的动物模型均有报道。然而，NK细胞在肝脏损伤中的作用似乎显得很神秘。本部分研究目的就是建立一种NK细胞介导的肝炎小鼠动物模型，来促进NK细胞在自身免疫性肝炎的机制研究。我们采用了TLR3配体聚肌胞(poly(I:C))活化NK细胞，观察后续的肝脏损伤。B6小鼠腹腔注射poly(I:C)20微克／克体重，通过流式细胞术分析肝脏NK细胞比例和绝对数，血清转氨酶和HE染色被用作评价肝脏损伤的指标。发现poly(I:C)注射后，肝脏NK细胞显著
【学位单位】：中国科学技术大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R575
【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
第一章 文献综述
    第一节 固然免疫细胞在肝脏损伤中的作用
        1、NKT细胞
        2、NK细胞
    第二节 固有免疫细胞在肝脏再生中的调节机制
        1、肝脏再生过程中固有免疫细胞肝内“重新入住”的机制
        2、固有免疫细胞负调节肝脏再生
        3、NK细胞
        4、NKT细胞
        5、Kupffer细胞
第二章 前言
第三章 材料和方法
    第一节 肝脏淋巴细胞的分离和固有免疫特性
    第二节 新型NK细胞介导的肝炎模型的建立
    第三节 再探NK细胞在CONA诱导的肝炎模型中的作用
    第四节 选择性去除肝脏NKT细胞促进了小鼠肝脏再生
    第五节 NKT细胞负调节HBV转基因小鼠肝脏再生:一种新的HBV致病机制
第四章 结果和讨论
    第一节 肝脏淋巴细胞的分离和固有免疫特性
        1、放血对肝脏淋巴细胞分离的影响
        2、酶消化对肝脏淋巴细胞表面标记的影响
        3、两种方法在细胞得率上没有差异
        4、机械研磨法分离的肝脏淋巴细胞适合功能分析
        5、肝脏具有固有免疫器官特点
    第二节 新型NK细胞介导的肝炎模型的建立
        1、poly(I:C)偏向性地诱导NK细胞向肝内聚集
        2、poly(I:C)注射引起NK细胞活化
        3、poly(I:C)诱导血清ALT和AST上升和肝内炎症反应
        4、NK细胞是poly(I:C)诱导的效应细胞
        5、NK细胞介导poly(I:C)诱导的肝脏损伤的分子机制
        6、Kupffer细胞分泌IL-12导致NK细胞肝内聚集和后续的肝脏损伤
        7、VCAM-1在poly(I:C)诱导的NK细胞聚集和肝脏损伤发挥重要作用
    第三节 再探NK细胞在CONA诱导的肝炎模型中的作用
        1、ConA诱导的肝脏损伤中不依赖NK细胞
        2、ConA诱导的肝脏损伤模型中NK细胞毒活性削弱
        3、高浓度IFN-γ刺激的NK细胞识别功能缺陷
        4、高浓度IFN-γ刺激对NK细胞效应分子的影响
    第四节 选择性去除肝脏NKT细胞促进了小鼠肝脏再生
        1、非肝脏毒性ConA剂量的选择
        2、非肝脏毒性剂量ConA预处理刺激小鼠肝脏再生
        3、ConA预处理引起肝脏NKT细胞减少
        4、ConA预处理导致NKT细胞经历活化诱导的凋亡
    第五节 NKT细胞负调节HBV转基因小鼠肝脏再生:一种新的HBV致病机制
        1、在部分肝切除动物模型中HBV-tg小鼠肝脏再生延迟
        2、在肝脏再生的早期HBV-tg小鼠NKT细胞数目和活化状态显著增强
        3、清除NKT细胞改善了HBV-tg小鼠肝脏再生下降
        4、HBV-tg小鼠对过继转移的再生肝脏NKT细胞敏感
        5、HBV-tg小鼠肝细胞表面上升CD1d分子导致NKT细胞活化和肝脏再生下降
        6、HBV-tg小鼠NKT细胞在肝脏切除后分泌IFN-γ增加
        7、阻断CD1d或者中和IL-12抑制了NKT细胞活化
        8、IFN-γ中和促进了HBV-tg小鼠肝脏再生
        9、外源性注射重组小鼠IFN-γ加重了HBV-tg小鼠肝脏再生缺陷
        10、IFN-γ抑制肝脏再生是通过负调节细胞周期,而不是诱导肝细胞凋亡
        11、HBV-tg小鼠对四氯化碳诱导的损伤敏感,并且损伤后肝脏再生下降
    第六节 研究展望
致谢
附录
    一、攻读博士学位期间发表和拟发表的论文
    二、攻读博士学位期间所获得的奖励
    三、攻读博士学位期间所获得的国家发明专利
    四、攻读博士学位期间参加的国际学术会议
附: 发表论文内容
附: 发明专利申请公开说明书

【共引文献】

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本文编号：2838619