高原低氧致大鼠胃黏膜组织细胞凋亡研究

发布时间：2020-10-17 13:52

　　 目的:通过观察高原低氧环境下大鼠胃黏膜组织细胞形态、凋亡情况以及检测凋亡相关蛋白P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的m RNA及蛋白的表达水平,揭示细胞凋亡在不同高原低氧时间点变化水平及其在高原低氧所致胃黏膜损伤中的作用。方法:选择50只雄性Wistar大鼠(体重170±10g,平均年龄6-8周龄),按照随机分配原则分为平原对照组(n=10只,西安,海拔500m)与高原低氧组(n=40只,青海省玉树市杂多县,海拔4300m),根据高原低氧暴露时间不同又随机分为1d、7d、14d、21d,4个亚组,每组各10只;采集各组大鼠胃黏膜组织,分别用HE染色及透射电镜观察胃黏膜组织细胞形态变化及凋亡改变情况;采用Real-time PCR法检测各组大鼠胃黏膜组织中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9m RNA表达水平;采用Western blot法检测各组大鼠胃黏膜组织中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。结果:(1)HE染色显微镜观察结果:平原对照组胃黏膜正常,胃腺结构完整,细胞排列基本规则,而高原实验组大鼠胃黏膜组织随高原低氧暴露时间延长,炎症细胞浸润逐渐增多,胃腺周围局部出血,胃腺结构破裂,局部细胞肥大,边界不清,并且胃黏膜细胞出现细胞核固缩凋亡;(2)透射电镜观察结果:对照组胃黏膜细胞正常,随着时间延长,无特殊表现;而实验组随着高原低氧环境暴露时间延长,细胞排列紊乱,细胞核形状不规则,细胞质内线粒体肿胀明显,细胞质内可见自噬样结构及被吞噬的凋亡细胞;(3)Real-time PCR法检测结果:与对照组比较,实验组各亚组大鼠胃黏膜组织P53、Caspase-3、Caspase-9 m RNA表达水平均升高,差异具有统计学意义(p0.05),且随暴露时间的延长表达水平逐渐增加(p0.05),而Bcl-2 m RNA表达水平在低氧1d组升高(p0.05),随后随着高原低氧环境暴露时间延长,其表达水平逐渐降低(p0.05)(4)Western blot法结果:与对照组相比,实验组大鼠胃黏膜组织P53、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平均升高(p0.05),且随暴露时间的延长表达水平逐渐增加,Bcl-2蛋白表达水平降低,且随着暴露时间的延长表达水平逐渐降低(p0.05)。结论:高原低氧可能通过升高细胞凋亡水平导致胃黏膜组织细胞损伤,并且细胞凋亡水平的升高与高原低氧暴露时间成正相关。
【学位单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R57;R-332
【部分图文】：

第 3 章 结果3.1 HE 染色观察大鼠胃黏膜组织大体形态结构及凋亡改变情况通过建立高原低氧环境（海拔 4300m）暴露下的大鼠胃黏膜组织损伤模型，行 HE 染色后显微镜下观察结果显示（如图 3.1）：对照组：胃黏膜正常，胃腺结构完整，细胞排列基本规则；高原低氧第 1 天：少量炎细胞浸润，胃腺周围少量出血，少量胃腺结构破裂；高原低氧第 7 天：大量炎细胞浸润，胃腺周围局部出血，少量胃腺结构破裂，胃黏膜细胞出现局灶性嗜酸性变；高原低氧第14 天：大量炎细胞浸润， 胃腺周围少量出血，局部胃腺结构破裂，胃黏膜细胞肥大并出现局灶性嗜酸性变；高原低氧第 21 天：大量炎细胞浸润，大量胃腺变形破裂，局部细胞肥大，细胞边界不清，胃黏膜细胞出现细胞核固缩凋亡。以上可以得出：高原低氧环境暴露下可致实验组大鼠胃黏膜损伤，且随着暴露时间延长，损伤逐渐加重，并且可见细胞核固缩凋亡。

3.3 各组大鼠胃黏膜组织的 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA表达水平Real-time PCR 法检测各组大鼠胃黏膜组织凋亡相关蛋白 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表达水平，结果显示（如图 3.3-3.5，如表 3.1）：与对照组相比，高原低氧组（1d,7d,14d,21d）大鼠胃黏膜组织凋亡相关蛋白 P53、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表达水平均增加，且随着高原低氧暴露的时间延长其表达逐渐增加（均 p>0.05），与 Western blot 法检测蛋白表达水平基本一致，而 Bcl-2 的 mRNA 表达水平在高原低氧组 1d 升高，随后其表达随着时间的延长而逐渐降低（p<0.05）。图 3.2 不同时间点大鼠胃黏膜组织细胞电镜观察结果（X30000）

表3.1 各组大鼠胃组织P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达水平（ x±s,n=10）组别 例数 P53 Bcl-2 Caspase-3 Caspase-9对照组 10 0.98±0.32 3.39±1.16 1.00±0.23 0.68±0.10低氧 1d 10 1.74±0.13* 4.44±1.22* 2.29±0.58* 1.77±0.39*低氧 7d 10 2.49±0.57*△3.27±1.08△3.35±1.01*△2.98±0.87*△低氧 14d 10 4.06± 1.08*△#2.19±0.74*△#5.17±1.37*△#4.02±1.54*△#低氧 21d 10 5.14± 1.25*△#$1.26±0.33*△#$6.28±1.09*△#$5.71±1.66*△#$F 45.55 15.95 50.80 31.58P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001注：*：与对照组比较，p＜0.05;△：与低氧 1d 组比较，p＜0.05; #：与低氧 7d 组比较，p＜0.05；$：与低氧 14d 组比较，p＜0.05.
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本文编号：2844869