高盐对幽门螺旋杆菌粘附相关基因表达以及粘附能力的影响

发布时间：2020-10-21 16:32

　　 目的幽门螺旋杆菌是全球广泛流行的严重危害人类健康的革兰氏阴性杆菌。幽门螺旋杆菌粘附定植于胃黏膜之后,进行大量增殖,并且毒力因子CagA通过T4SS系统进入细胞内。研究发现高盐可以导致更多的CagA进入细胞。本研究旨在探讨不同盐浓度对幽门螺旋杆菌黏附能力以及粘附相关基因表达的影响。方法用选择性的固体培养基进行幽门螺旋杆菌培养。采用革兰氏染色对幽门螺旋杆菌进行染色,并在显微镜下观察不同盐浓度对其形态学的影响。用TRIzol提取总RNA,用实时定量PCR (qRT-PCR)检测不同时间点和不同盐浓度下粘附相关基因babA2、sabA、alpA/B、oipA、hopZ的表达。采用Skindersoe等学者开发的定量检测粘附能力的方法检测高盐对幽门螺旋杆菌的粘附能力的影响。采用SPSS 19进行数据统计分析。结果高盐能够抑制幽门螺旋杆菌的增殖,随着盐浓度的增加,球形的幽门螺旋杆菌比例越来越大。qRT-PCR的结果显示,在48小时,粘附相关基因babA2、sabA、 alpA/B、oipA、hopZ的表达随着盐浓度的增加而上升,具有统计学意义(P0.05)；在24和72小时,粘附相关基因的表达并没有统一的规律。选择在不同盐浓度培养基中培养48小时的幽门螺旋杆菌和胃癌细胞SGC-7901进行粘附实验,结果发现在不同的感染指数(MOI为100：1和200：1)时,高盐对幽门螺旋杆菌粘附细胞的能力没有明显影响(P0.05)。结论高盐能够抑制幽门螺旋杆菌的增殖,随着盐浓度的增加,球形的幽门螺旋杆菌比例越来越多。在48小时,粘附相关基因babA2、sabA、alpA/B、oipA、hopZ的表达随着盐浓度的增加而上升。幽门螺旋杆菌的粘附能力不随着盐浓度的增加而升高。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R735.2;R573
【部分图文】：

按照方法学中的流程进行幽口螺旋杆菌的复苏，微需氧培养７２小时之，培??养板可见针尖样的、透明的菌落；用无菌牙签挑取少许菌落进行革兰氏染色，湿??微镜下可レッ看见大量的螺旋形、海轉状的革兰巧阴性的细菌（图１）。用无菌牙??签挑取少许菌落进行快速尿素酶试验，放入菌落时反应液立即由黄色变为玫瑰红??（图２）。通过革兰氏染色和快速尿素酶试验证实培养的细茜是幽口螺旋杆菌。??Ｉ?ｋ－＇?，?（?－??‘?，’?■?．?．?．？?－?■．??？?？?、?？?－二?＇??巧／—?ｊ??＜?－?＇?，ｉ：＇?‘??－０?＾?兴??？?－？’、?ｉ?－?？??Ｉ．?ｒ．?ｉ?■＇??／■、，？？?？?？？－?一??．－＇Ｖ?＇?、乂?＇?、一??，分？’‘手＇恭１??Ｉ＇；．、?■為??ｔ?？．??图１幽口螺旋杆菌的革氏染色（４００Ｘ?）??Ｆｉｇ．ｌ?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ?（４０〇ｘ?）??３．２高盐对巧口巧旋巧菌増殖能力的巧响??将正常培养的细茵接种于不同盐浓度的血平板培养基上，在２４、４８和７２小??时用１?ｍＬＰＢＳ冲洗、收集幽口螺旋杆菌

采用革兰氏染色，４００?Ｘ油镜下观察不同盐浓度对幽口螺旋杆菌形态学的影??响。发现随着盐浓度的増加，杆状的幽口螺旋杆菌明显减少，球形的幽口螺旋杆??菌明显増加。（图４）??Ａ?０?，?Ｂ??－＞?？?？??Ｉ?■、??．?■?－；?．?■—??Ｉ?／?＇?—?’?＊??■?＜?＇八＇一?？＊?〇??Ｊ?＾??Ｃ?Ｄ．?．?＇?‘Ｖ；，．’．．■??４?ｒ?．?．?．．?．一?Ｊ?＇■??＇?．．Ｖ／＇Ｙ／＇＇一；?ｄ＇?＞?’??Ｖ．?■?０?Ｖ．＇??＊ｒ?＇??图４不同浓度ＮａＣｌ对Ｗ．巧沁ｎ？形态学的影响（Ａ！正常：Ｂ！?０．５％ＮａＣｌ；?Ｃ：?１．０％ＮａＣｌ：?Ｄ！??１．５％ＮａＣｌ）（革兰氏染色４００Ｘ）??Ｆｉｇ．４?Ｉｍｐａｃｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓａｌｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｔｏ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ?（Ａ：?Ｎｏｒｍａｌ；?Ｂ：?０．５％??ＮａＣｌ；?Ｃ：?１．０％?ＮａＣｌ；?０：１．５％?ＮａＣｌ）?（Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?４００?Ｘ?）??３．４高盐对于幽口巧旋杆菌巧附相关基因的巧响??３．４．１?ｂａｂＡ２??在２４小时，Ｈ组之间无统计学差异（／？〉０．０５）。在４８小时，１．０％ＮａＣｌ组??和１．５％?ＮａＣｌ组的表达量均明显高于０．５％?ＮａＣｌ组，结果有统计学差异（户＜??０．０５）。在７２小时，１．０％?ＮａＣｌ组的表达量与０．５〇／〇?ＮａＣｌ组无差异（户＞０．０５），??１．５％?ＮａＣｌ组的表达量明显高于０．５％?ＮａＣｌ组

按照方法学中的流程进行幽口螺旋杆菌的复苏，微需氧培养７２小时之，培??养板可见针尖样的、透明的菌落；用无菌牙签挑取少许菌落进行革兰氏染色，湿??微镜下可レッ看见大量的螺旋形、海轉状的革兰巧阴性的细菌（图１）。用无菌牙??签挑取少许菌落进行快速尿素酶试验，放入菌落时反应液立即由黄色变为玫瑰红??（图２）。通过革兰氏染色和快速尿素酶试验证实培养的细茜是幽口螺旋杆菌。??Ｉ?ｋ－＇?，?（?－??‘?，’?■?．?．?．？?－?■．??？?？?、?？?－二?＇??巧／—?ｊ??＜?－?＇?，ｉ：＇?‘??－０?＾?兴??？?－？’、?ｉ?－?？??Ｉ．?ｒ．?ｉ?■＇??／■、，？？?？?？？－?一??．－＇Ｖ?＇?、乂?＇?、一??，分？’‘手＇恭１??Ｉ＇；．、?■為??ｔ?？．??图１幽口螺旋杆菌的革氏染色（４００Ｘ?）??Ｆｉｇ．ｌ?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ?（４０〇ｘ?）??３．２高盐对巧口巧旋巧菌増殖能力的巧响??将正常培养的细茵接种于不同盐浓度的血平板培养基上，在２４、４８和７２小??时用１?ｍＬＰＢＳ冲洗、收集幽口螺旋杆菌
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本文编号：2850354