自身免疫性肝炎淋巴细胞亚群异常及MSCs免疫调控机制的研究

发布时间：2020-10-31 22:19

　　 目的 通过检测自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis, AIH)患者的外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群和调节性T细胞表达,分析其与肝功能、免疫球蛋白和肝脏炎症活动指数(Hepatitis activity index, HAI)的相关性,了解淋巴细胞亚群在AIH发病中的作用机制,为AIH的诊治提供依据。对接受骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)移植治疗的AIH模型小鼠肝组织内CD3+细胞、干扰素-γ(Interferon-y, IFN-γ)、程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)、程序性死亡配体-1(Programmed death ligand-1, PD-L1)表达进行检测,初步探讨MSCs通过PD-1通路免疫调控治疗AIH的机制。 方法 1、选择确诊为AIH且未接受激素及免疫抑制剂治疗的患者20例,为AIH组,以20例健康成年人为对照组。两组分别进行肝功能指标(血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、γ-谷胺酰转移酶(y-glutamyltransferase,y-GT))、血清总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBIL);免疫球蛋白(免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA))的检测；AIH组行肝穿刺活组织病理检查,评价肝炎活动性指数HAI。应用流式细胞术分别检测两组外周血T、B淋巴细胞亚群表面标志的表达情况,并将淋巴细胞亚群比率与肝功能指标、免疫球蛋白及HAI评分进行相关性分析。 2、以AIH模型小鼠接受MSCs移植治疗,分为MSCs治疗组、PBS对照治疗组和正常对照组,三组分别于造模时、治疗后1周、4周三个时间点取鼠肝组织。三组小鼠不同时间点肝组织样本数均为10个。用免疫组化方法检测各组小鼠各时间点肝组织内CD3+、IFN-γ、PD-1和PD-L1的表达情况。 结果 1.AIH患者外周血淋巴细胞亚群异常改变与肝功能、免疫球蛋白和肝炎活动指数的关系 1.1AIH组外周血CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B、CD5+CD19+B细胞百分比及CD5+CD19+B/CD19+B细胞比值分别为46.00±16.84%、34.26±11.60%、13.6±5.55%、8.45±6.09%、0.62土0.15,均明显高于对照组的35.50±3.59%、25.21±2.89%、9.85±1.21%、2.84±0.92%、0.29±0.10,差异有统计学意义(P0.05)。AIH组CD3+T细胞百分比、CD4+CD25+CD127dim T细胞百分比和CD3+CD4+T/CD3+CD8+T细胞比值分别为64.23±13.24%、5.59±2.17%、1.30±±0.25,而对照组为69.38±4.32%、6.09±1.36%、1.42±0.19,两组相比差异无统计学意义(P0.05)。 1.2AIH组ALT、AST、ALP、γ-GT、TBIL、DBIL分别为197.00±183.915U/L188.65±180.00U/L、189.30±38.10U/L、148.00±39.61U/L、87.88±114.88μmol/L、59.97±83.91μmol/L;正常对照组分别为25.65±10.80U/L、22.40±8.75U/L、90.85±35.51U/L、31.60±16.29U/L、13.90±10.90μmol/L、5.59±4.16μmol/L两组相比差异有统计学意义。AIH组IgG、gM、IgA,分别为1824.95±753.54mg/dL、141.13±63.04mg/dL、284.10±176.03mg/dL,正常组为1182.70±325.12mg/dL、165.20±90.23mg/dL.229.00±119.16mg/dL,两组IgG相比,有明显统计学差异(P0.01)；而IgM, IgA,两组相比无统计学差异(P0.05)。AIH组HAI评分为7.60±±4.51分。 1.3AIH组CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞百分比分别与血清ALT、AST、肝脏HAI评分呈正相关,相关系数r=0.896、0.879、0.763(P0.01)和r=0.877、0.843、0.642(P0.01),与ALP、γ-GT、TBIL、DBIL无明显相关性(P0.05);AIH组患者的B细胞亚群CD5+CD19+B细胞百分比分别与肝功能指标ALT、AST呈正相关,相关系数r分别为0.486,0.450(P0.05),与HAI评分呈正相关(r=0.544,P0.05),与ALP、GGT、TBIL、DBIL无相关性(P0.05)；CD5+CD19+B细胞比率与IgG呈显著正相关(r=0.802,P0.01),与IgM、IgA无相关性(P0.05)。 2MSCs治疗后肝组织中CD3、IFN-γ、PD-1和PD-L1表达。 2.1MSCs治疗组在造模时、治疗后1周、4周三个时间点CD3+细胞的百分比分别为36.00±5.07%、27.94±2.33%、21.58±4.60%,组内相比,差异具有统计学意义(P0.05),治疗后1周、4周与造模时相比,CD3+细胞百分比分别下降了22%和40%。且在治疗后1周与4周时,MSCs治疗组与PBS治疗组组间相比,差异有统计学意义(t=3.784,P0.05vs t=4.409,P0.05)。 2.2MSCs治疗组三个时间点IFN-γ阳性细胞百分比分别为30.06±5.19%、26.52±3.88%、20.86±3.35%,组内相比,差异具有统计学意义(P0.05),在治疗后1周、4周两个时间点,与造模时相比,IFN-γ阳性细胞百分比分别下降了12%和31%。在治疗后1周与4周,MSCs治疗组与PBS治疗组组间相比,差异有统计学意义(t=3.182,P0.05vst=4.679,P0.05)。 2.3MSCs治疗组三个时间点PD-1阳性细胞表达率分别为17.92±4.29%、13.24±2.71%、10.98±2.47%,组内相比,差异具有统计学意义(P0.05),在治疗后1周、4周两个时间点,与造模时相比,PD-1阳性细胞百分比分别下降了26%和39%。在治疗后1周与4周,MSCs治疗组与PBS治疗组相比,差异有统计学意义(t=3.862,P0.05vst=,4.289,P0.05)。 2.4MSCs治疗组三个时间点PD-L1阳性细胞百分比分别为3.12±1.19%、8.94±3.39%、12.38±4.20%,组内相比,差异具有统计学意义(P0.05),在治疗后1周与4周,MSCs干预后,PD-L1阳性细胞表达,分别比造模时上升了1.9倍和3倍。同时,MSCs治疗组与PBS治疗组组间相比,差异有统计学意义(t=.-4.87,P0.05vs t=6.15,P0.05)。 结论 1、AIH患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19+B细胞、CD5+CD19+B细胞百分比以及CD5+CD19+B/CD19+B细胞比值,较正常人明显升高；并且与AIH患者肝功能指标ALT、AST、IgG及HAI呈正相关关系,提示T、B淋巴细胞亚群的异常表达增高与肝损害程度相一致。 2、AIH患者的调节性T细胞数量较正常人相比,并没有明显减少,说明调节性T细胞的数量变化在AIH的致病过程中并未发挥作用。 3、AIH小鼠MSCs移植治疗后,肝组织中CD3+、IFN-γ与PD-1的阳性细胞表达率明显下降,而PD-L1阳性细胞表达率明显增高,说明MSCs可能通过抑制细胞因子表达及调控PD-1通路的免疫调节作用而具有治疗AIH的作用。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R575.1
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞亚群异常改变与肝炎活动程度的相关性研究
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验资料
        1.1.2 实验方法
        1.1.3 统计学处理
    1.2 结果
        1.2.1 AIH淋巴细胞亚群改变
        1.2.2 AIH组与正常对照组患者肝功能、免疫球蛋白、及HAI改变
        1.2.3 AIH组淋巴细胞亚群改变与肝功能、免疫球蛋白及HAI的相关分析
    1.3 讨论
        1.3.1 AIH患者T淋巴细胞亚群与临床肝功能、肝炎活动度的相关性
        1.3.2 AIH患者B淋巴细胞亚群与血清免疫球蛋白的相关性
        1.3.3 调节性T细胞与AIH
    1.4 小结
二、骨髓间充质干细胞调控PD-1通路治疗小鼠自身免疫性肝炎的实验研究
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 统计学处理
    2.2 结果
        2.2.1 MSCs治疗前后CD3在肝组织中的表达情况
        2.2.2 MSCs治疗前后IFN-γ在肝组织中的表达情况
        2.2.3 MSCs治疗前后PD-1在肝组织中的表达情况
        2.2.4 MSCs治疗前后PD-L1在肝组织中的表达情况
    2.3 讨论
        2.3.1 PD-1通路在AIH发病过程中所起的作用
        2.3.2 MSCs调控PD-1通路治疗AIH的机制探讨
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 自身免疫性肝炎发病机制与治疗的研究进展
    综述参考文献
致谢

【参考文献】

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1 马勇;丁体龙;袁福华;夏志学;;自身免疫性肝炎大鼠外周血CD4~+细胞、肝细胞特异性脂蛋白抗体及Th细胞因子水平之间的相关性[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年28期

2 倪勋;贾永前;孟文彤;钟凌;曾彦;;B7-H1在人骨髓间充质干细胞上的表达及其对T淋巴细胞增殖的影响[J];中国实验血液学杂志;2009年04期

3 赵宗豪,梅俏,吴军,胡咏梅,徐新华,许建明;褪黑素保护大鼠慢性肝损伤的动态观察[J];安徽医科大学学报;2003年04期

4 范列英,仲人前;自身免疫性肝炎分子免疫机制研究进展[J];中华消化杂志;2003年01期

本文编号：2864584