IL-29和IFN-α体外抗乙肝病毒作用与机制探讨

发布时间：2020-11-06 06:40

　　 目的探讨IFN-α和IL-29在HepG2.2.15细胞中抗乙肝病毒的作用机制。 方法培养HepG2.2.15细胞,并使用IL-29和IFN-α处理细胞,通过RT-PCR、普通PCR与Real-time PCR,从mRNA水平探讨IL-29抗乙肝病毒的效果;并分析IL-29和IFN-α诱导抗病毒蛋白MxA、2',5'-OAS和PKR的mRNA表达水平。同时使用Western-Blot分析IL-29和IFN-α激活的信号通路。再使用相关信号通路的特异性阻断剂,阻断IL-29和IFN-α激活的相关信号通路,从而探讨信号通路与抗病毒蛋白转录表达之间的关系。 结果IL-29和IFN-α能明显降低HepG2.2.15细胞中乙肝病毒mRNA的表达水平,且能够上调抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS的mRNA表达(IFN-α还能够上调PKR的转录),并能促进AKT和ERK的磷酸化。使用LY294002(50μM)和PD98059 (100μM)能够分别有效抑制HepG2.2.15细胞中AKT和ERK的磷酸化,并且当预先使用LY294002和PD98059处理细胞1小时,再加入IL-29或IFN-α刺激HepG2.2.15细胞后,使用Western Blot技术无法检测到P-AKT和P-ERK的存在。当AKT磷酸化被抑制时,抗病毒蛋白2’, 5’-OAS、MxA和PKR转录水平的表达也相应降低;当ERK磷酸化被阻断时,MxA转录显著增强,但是2’, 5’-OAS和PKR的表达却无明显变化。 结论在HepG2.2.15细胞中IL-29和IFN-α有显著的抗乙肝病毒作用。在机制研究中我们首次发现抗病毒蛋白2’, 5’-OAS、MxA和PKR转录水平的表达和PI3K-AKT信号通路呈正相关;Raf-MEK-ERK信号通路与MxA转录呈负相关,但是与2’, 5’-OAS和PKR却无显著的关系。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R512.62
【部分图文】：

（图3）信号通路[9-12]。PI3K-AKT信号通路在细胞内外的信号传导中起重要作用。它能够把细胞外界物质（如：生长因子、激素、有丝分裂原和细胞因子等）的刺激传递到细胞内部，从而抑制细胞凋亡促进生长。LY294002（图1）是PI3K的特异性抑制剂，它能够阻断PI3K下游物质的活化，包括AKT的激活[13, 14]。Raf-MEK-ERK信号通路是由Ras、Raf、MEK和ERK组成的信号通路，在细胞的增殖、分化、转录调控中起重要作用。PD98059（图1）是Raf-MEK-ERK信号通路的特异性抑制剂。它能和MEK1结合形成没有活力的MEK1的复合体，从而选择性的

中起着关键性作用，包括对MxA、2’,5’-OAS和PKR表达的诱导[4-7]。但是单一的JAK-STAT信号通路是不足以解释干扰素诱导的所有生物学效应[8]。据报道，IFNs能够在一些细胞中也能够激活PI3K-AKT (图2)和Raf-MEK-ERK（图3）信号通路[9-12]。PI3K-AKT信号通路在细胞内外的信号传导中起重要作用。它能够把细胞外界物质（如：生长因子、激素、有丝分裂原和细胞因子等）的刺激传递到细胞内部，从而抑制细胞凋亡促进生长。LY294002（图1）是PI3K的特异性抑制剂，它能够阻断PI3K下游物质的活化，包括AKT的激活[13, 14]。Raf-MEK-ERK信号通路是由Ras、Raf、MEK和ERK组成的信号通路，在细胞的增殖、分化、转录调控中起重要作用。PD98059（图1）是Raf-MEK-ERK信号通路的特异性抑制剂。它能和MEK1结合形成没有活力的MEK1的复合体，从而选择性的

11/57图3、Raf-MEK-ERK信号通路，引至：Cell Signaling Technology, Inc.Fig 3, Raf-MEK-ERK Signal Pathway，Cited from：Cell Signaling Technology, Inc.
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本文编号：2872790