MFG-E8基因敲除促进小鼠非酒精脂肪性肝炎的实验研究

发布时间：2020-11-11 02:58

　　 目的:探讨乳脂球表皮生长因子-8(milk fat globule-epidermal growth factor-8,MFG-E8)在非酒精脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)中的作用及其潜在机制。方法:将24只野生型(wild type,WT)和MFG-E8基因敲除(knock out,KO)C57BL/6小鼠随机分成4组(CD-WT组、MCD-WT组、CD-KO组和MCD-KO组)。其中CD-WT组和CD-KO组给予对照饲料(control diet,CD)饮食;MCD-WT组和MCD-KO组给予蛋氨酸和胆碱缺乏模型饲料(methionine and choline deficient diet,MCD)饮食。期间密切观察小鼠身体状态,并每周固定时间测量记录其体重。5周后收取小鼠血液和肝脏组织。试剂盒检测血清中的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,AST)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性水平,肝脏组织中的甘油三酯(triglyceride,TG)含量;苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色检测评估肝脏病理学变化;油红O染色评价肝脏脂肪变性程度;天狼星红和马森三色染色评估肝脏纤维化程度;免疫荧光染色检测肝脏中巨噬细胞(F4/80)和中性粒细胞(Ly6G)募集和浸润情况;酶联免疫吸附试验(enzyme-lineked immunosorbent assay,ELISA)检测肝组织中细胞因子TNF-?和IL-1?蛋白的表达;实时定量逆转录聚合酶链式反应(quantitatative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM、CCL_2、CXCL_2和TGF-?细胞因子mRNA的表达;免疫蛋白印迹法(western blot,WB)检测肝脏组织中TLR4信号通路中TLR4、p-IRAK1、p-p38、p-p65和p65蛋白表达。结果:1.与CD-WT组相比,MCD-WT组小鼠血清中ALT、AST的活性水平、肝组织TG含量显著增高,肝脏病理损伤和脂肪变性、肝脏纤维化程度加重,肝脏巨噬细胞和中性粒细胞的浸润增加,肝组织内细胞因子TNF-α和IL-1β蛋白及TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM、CCL_2、CXCL_2和TGF-βmRNA的表达增多,TLR4相关通路TLR4、p-IRAK1、p-p38、p-p65和p65蛋白的表达上调。2.与MCD-WT组相比,MCD-KO组小鼠血清ALT、AST的活性水平及肝组织TG含量增高,肝脏脂肪变性、纤维化程度加重,巨噬细胞和中性粒细胞的浸润增加,细胞因子TNF-α和IL-1β蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM、CCL_2、CXCL_2和TGF-βmRNA的表达均上调,TLR4通路TLR4、p-IRAK1、p-p38、p-p65和p65等相关蛋白的表达增加。结论:MFG-E8基因敲除促进非酒精脂肪性肝炎的发展,这可能与其增加炎症细胞因子的释放,增加炎性细胞的的浸润,活化TLR4信号相关通路,扩大炎症级联反应有关。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R575.5
【部分图文】：

1.2.12 统计学分析所有数据以 X ±SD来表示，采用单因素方差分析或 t 检验进行统计分析， p＜ 0.05 时具有统计学意义。2 结果2.1 MFG-E8 基因敲除增加 NASH 小鼠血清中 ALT 和 AST 的活性血清 ALT 和 AST 活性是评价肝脏功能损伤的指标，如图 1 所示，与 CD-WT组相比，MCD-WT 组小鼠血清中的 ALT 和 AST 活性水平显著增加（p＜0.01）。与 MCD-WT 组相比，MCD 组小鼠血清中的 ALT 和 AST 活性水平显著增加（p＜0.01）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文2.2 MFG-E8 基因敲除加重 NASH 小鼠肝脏的病理学损伤如图 2A HE 染色结果所示， CD-WT 组和 CD-KO 组小鼠肝组织结构完整，肝小叶完整，肝板正常，肝细胞围绕中央静脉呈条索状排列。与 CD-WT 组相比，MCD-WT 小鼠肝脏组织肝小叶完整性被破坏，肝细胞排列紊乱，大部分肝细胞核被挤到细胞边缘呈明显的空泡状，并伴随大量炎症细胞浸润。与MCD-WT组相比，MCD-KO 组小鼠脂肪空泡更大更多，炎症细胞大多汇聚在汇管区，有的可见炎症细胞团凝集，胞浆疏松化更严重。如图2B NAS评分所示，与CD-WT组相比，MCD-WT 脂肪变性、炎症和气球样变加重，通过 NAS 评分系统的可得出MCD-WT 组小鼠已患 NASH。与 MCD-WT 组相比，MCD-KO 组小鼠脂肪变性、炎症和气球样变更严重，通过 NAS 评分系统的可得出 MCD-KO 更加严重。

图 3.MFG-E8 加重 NASH 小鼠肝脏脂肪变性Fig 3. MFG-E8 aggravates hepatic steatosis in NASH miceO 染色结果×200 B: 肝 TG 水平（与 CD-WT 相比##P＜0.01 ，与 MCD相比**P＜0.01）G-E8 基因敲除加重 NASH 小鼠肝脏的纤维化4A，马森三色染色所示，与CD-WT组相比，MCD-WT组小鼠肝脏增加，红色胞浆减少，与 MCD-WT 组相比，MCD-KO 组小鼠胶原更多红色胞浆减少。如图 4B，天狼星红染色所示，与 CD-WT 组相T 组小鼠肝脏红色胶原纤维增加，与 MCD-WT 组相比，MCD-KO 组纤维染色更多，图中也可看出脂肪空泡增多。
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王洪东;;中医药疗脂肪肝有优势[J];开卷有益-求医问药;2017年03期

2 毛石林,孙世义;脂肪性肝炎的诊治体会[J];第一军医大学分校学报;2002年02期

3 肖扬;药物与脂肪性肝炎[J];肝脏;2002年04期

4 黄文静;;丹参注射液联合行为干预治疗非乙醇性脂肪性肝炎[J];全科护理;2014年18期

5 张磊;张玮;;苏苷康治疗脂肪性肝炎86例临床观察[J];现代医药卫生;2007年05期

6 牛德金;肥胖儿须警惕特发性脂肪性肝炎[J];家庭医学;1996年13期

7 陈岩;;检测血清透明质酸对脂肪性肝炎预后评价的临床研究[J];当代医学;2010年18期

8 潘兆随,闫爱国,李梅,刘芬,马先宾;脂肪性肝炎患者血清FT_3、FT_4、STSH检测及临床意义[J];山东医药;2001年20期

9 张国梁;杨小军;刘永华;刘丽丽;李艳;;α1抗胰蛋白酶缺乏症合并脂肪性肝炎1例报道[J];中西医结合肝病杂志;2013年01期

10 唐秀丽;朗淑敏;;轻身降脂方治疗脂肪性肝炎30例临床观察[J];河北中医;2012年07期

相关博士学位论文 前4条

1 赵喜;蛇床子素经PPARα/γ信号通路治疗大鼠高脂性脂肪性肝炎的研究[D];苏州大学;2016年

2 张岩;PPARα/γ信号通路在高脂性脂肪性肝炎发病机制中的作用研究[D];苏州大学;2015年

3 王晓晶;环氧二十碳三烯酸在非酒精性脂肪性肝炎中的作用及其相关机制研究[D];华中科技大学;2014年

4 杜晓红;他莫昔芬抑制埃博拉病毒感染及诱导脂肪性肝炎的机制研究[D];中国农业大学;2016年

相关硕士学位论文 前7条

1 苏倩倩;拮抗P2X7受体对酒精诱导的脂肪性肝炎和肠道微生态变化的作用及机制研究[D];安徽医科大学;2019年

2 吴盛旺;MFG-E8基因敲除促进小鼠非酒精脂肪性肝炎的实验研究[D];重庆医科大学;2019年

3 盛芳;细胞色素P4502E1调控酒精与高脂协同所致脂肪肝炎的小鼠病理模型构建[D];川北医学院;2017年

4 朱增燕;蚕蛹油对大鼠高脂性脂肪性肝炎的治疗作用及其机制研究[D];苏州大学;2010年

5 邱伟刚;脂肪性肝炎肝细胞癌临床病理特点及切除术后的预后分析[D];福建医科大学;2016年

6 李莹;卢秉久教授治疗非酒精性脂肪性肝病经验述要[D];辽宁中医药大学;2010年

7 王策;p38 MAPK/NF-κB在慢性间歇低氧诱导的NASH中调控作用的研究[D];天津医科大学;2014年

本文编号：2878654