内质网应激通过Insig-1泛素化和SCAP调节肝细胞脂质代谢及机制探讨

发布时间：2020-12-04 01:20

　　目的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是代谢综合征在肝脏的表现,是我国最常见的慢性肝病之一。NAFLD发病机制复杂,很多环节尚未完全清楚,其主要病理改变是甘油三酯在肝细胞内异常堆积。目前的研究提示内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）参与了NAFLD的发生和发展过程,是NAFLD发病机制研究中的热点问题。ERS对肝细胞脂质沉积的影响及其具体机制均有待进一步研究。固醇调节元件结合蛋白（Sterol regulatory element binding protein, SREBP）是与脂肪生成基因调节区的固醇调节元件结合的锌脂蛋白,在维持体内脂质代谢平衡中起调控作用。其中,SREBP-1c是调节与肝脏脂肪合成有关的酶的活性和表达的关键转录因子,促进肝细胞脂肪酸合成代谢。固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein, SCAP）的主要功能是转运SREBP-1c至高尔基体进行水解激活。胰岛素诱导基因1（insulin induce... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１?Ｌ０２和Ｈ巧Ｇ２肝细胞ＧＲＰ７８的ｍＲＮＡ和蛋白水平??＊：?Ｐ＜０．０５，与空白组比较，＃：?Ｐ＜０．０５，与巧组比较??

构建的Ｉｎｓｉｇ－ｒ慢病毒过表达载体ＬＶ－５（ｐＬＶＥＦｌａ／ＧＦＰ＋Ｐｕｒｏ）中携带有ＧＦＰ?（绿??色巧光）基树，转染肝细胞后，倒置巧光显微镜下可见大量绿色巧光蛋白的表达??即转染成功（见图３．１－３．２）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测到Ｈ巧Ｇ２ＬＶ－５肝细胞的Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋??白表达，成功建立稳定过表达Ｉｎｓｉｇ－１基内的化ＰＧ２ＬＶ－５肝细胞株。??ｆ編ＭＭ??誦誦圓??图３．１?Ｉｎｓｉｇ－ｌ过表达慢病毒的绿色巧光蛋白（ｘ２００）??Ａ：转染后４８ｈ白光Ｂ：转染后４８ｈ巧光Ｃ：转染后９６ｈ白光化转染后９化巧光??Ｆｉｇ．３．Ｉ?Ｔｈｅ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｐｒｏ化ｉｎ?ｏｆ?ｌｎｓｉｇ－１?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?（ｘ２００）??Ａ：?Ｔｈｅ?ｗｈｈｅ?ｌｉｇｈｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｂ：?Ｔｈｅ?ｇｉ＊ｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?４８ｈ??Ｃ：?Ｔｈｅ?ｗｈｈｅ?ｌｉｇｈｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?９６ｈ?Ｄ：?Ｔｈｅ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?９６ｈ??４５??

ＡＭＦＲ－ｌｓｉ民ＮＡ＋Ｔｇ姐与ＴＴｇ组相比较，Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋白表达显著增多（Ｐ＜０．０５）；阴性对??照＋Ｔｇ组与Ｔｇ组相比无明显变化Ｐ＞０．〇ｙ，说明干扰ＡＭＦＲ，ＥＲＳ状态下巧细胞??Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋白水平上调。见表３．３，图３．５。??表３．３各组肝细胞Ｉｎｓｉｇ－ｌ的相对ｍＲＮＡ和蛋白表达量（均数准差，ｎ＝３）??Ｔａｂ．３．３?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｍＲＮＡ?ａｎｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅ邱ｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆ?Ｉｎｓ皆１?（ｍ凶ｎｓ±ＳＤ，?ｎ＝３）??空白对照组?Ｔｇ組?阴性对照＋?ＡＭＦＲ－ｌｓｉＲＮＡ＋??Ｔｇ组?Ｔｇ组??Ｌ０２?ｍＲＮＡ?ｌ．ＯｆｔｔＯ．ＯＯ?１．９６±０．２０＊?１．９２±０．２１，?１．８６±０．２３？??ｐｒｏｔｅｉｎ?０．６２±０．０６?０．２５±０．０４＊?０．２６±０．０４?０．４８±０．０５＊＊??ＨｅｐＧ２ＬＶ－５?ｍＲＮＡ?ｌ．ＯＯｉＯ．ＯＯ?１．７６±０．２１＊?１．７４±０．２０＊?１．８５±０．２：３，??ｐｒｏ?化化?Ｇ．８６±０．０７?０．３８±０．０６ｉ?０．３６±０．０５?０．６７：ｔ〇．０６ｂ??ａ：?Ｐ＜０．０５，与空白組比较ｂ：?Ｐ＜０．０５，与巧组相化??ａ：?Ｐ＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?化化ｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏ叩，ｂ：?Ｐ＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｉＨｏ?Ｔｇ?ｇｒｏｕｐ??４９??


本文编号：2896780