非AIH炎症对自身免疫性肝炎（AIH）发病的影响

发布时间：2020-12-09 06:49

　　目的:探讨非AIH炎症在引发自身免疫性肝炎中发挥的作用。方法:（1）小鼠尾静脉注射不同剂量的质粒p CYP2D6,72 h后取小鼠肝组织,使用Western Blot方法检测小鼠肝脏中人CYP2D6蛋白表达情况。（2）Ad或CCl4感染小鼠后,在第5、10、15天取血清,使用ALT试剂盒检测血清ALT水平。（3）观察CCl4注射次数不同引发的炎症的特点。（4）Ad或CCl4感染小鼠后,在不同时间点取肝组织,提取总RNA,反转录后Real-time PCR检测与炎症有关的基因Tnfa,Il6,Il1b的表达。（5）尾静脉注射质粒p CYP2D6,并且尾静脉注射Ad或腹腔注射CCl4构建自身免疫性肝炎模型。（6）在Ad/p CYP2D6组和CCl4/p CYP2D6组,尾静脉持续注射质粒p CYP2D6,观察是否诱发更加严重的自身免疫应答和自身免疫性肝炎。（7）ELISA检测不同处理组小鼠血清中抗CYP2D6抗体和抗肝蛋白抗体滴度。（8）肝组织切片HE染色,观察炎症细胞浸润情况。（9）肝组织切片天狼星红染色,观察纤维化情况。结果:（1）不同剂量的质粒p CYP2D6通过尾静脉注射在肝组织中... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Ad和pCYP2D6的注射时间

pCYP2D6 的量 10、20、50、100、200 μg 分别和 Ad 注射小鼠，第 28 天检测的血清抗体结果显示，在小鼠体内只注射 Ad 是没有抗体产生的；只注射质粒pCYP2D6 时，有抗 CYP2D6 抗体产生，滴度很低，但没有抗肝蛋白抗体产生；当质粒 pCYP2D6 和腺病毒 Ad 共同处理小鼠时，可以看到既有抗 CYP2D6 抗体也有抗肝蛋白的抗体产生，与只注射质粒 pCYP2D6 组产生的抗体有显著差异10 、20、50 μg 质粒的量分别与 Ad 处理小鼠产生的抗 CYP2D6 抗体和抗肝蛋白抗体滴度逐渐升高，50、100、200 μg 质粒的量分别与 Ad 处理小鼠产生的抗CYP2D6 抗体和抗肝蛋白抗体滴度升高的幅度很小（图 1-2B）。由此可知不同剂量的模拟抗原和 Ad 诱发不同程度的自身免疫反应。此实验结果表明，Ad 与模拟抗原共同处理小鼠时才能诱发自身免疫应答，Ad 促进了模拟抗原诱发自身免疫应答。Ad 和人 CYP2D6 诱发自身免疫应答与Ad 的存在以及 CYP2D6 表达量有关。模拟抗原可以不是病毒的成分。

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文2、模拟抗原持续表达加强自身免疫应答Ad 和质粒 pCYP2D6 诱发的自身免疫应答有质粒剂量依赖性，那么增加质粒注射次数也就是模拟抗原持续表达会不会加强自身免疫应答呢？为了探究该问题，我们增加质粒的注射次数，使模拟抗原持续表达，与模拟抗原不持续表达组比较，观察两组产生的抗体是否有差异。根据第一部分的结果 Ad 与 50、100、200 μg 质粒 pCYP2D6 共同处理小鼠诱发自身免疫应答产生的抗体滴度基本无变化，所以我们选择用质粒 pCYP2D6 注射剂量是 50 μg。Ad 的剂量为1×109，尾静脉注射，增加质粒 pCYP2D6 注射次数，注射时间如图 2-1，质粒不持续注射组时间如图 1-1，在第 49 天取血清检测抗体滴度。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Auto immune hepatitis[J]. Nicole MF van Gerven,Ynto S de Boer,Chris JJ Mulder,Carin MJ van Nieuwkerk,Gerd Bouma.  World Journal of Gastroenterology. 2016(19)
[2]Juvenile autoimmune hepatitis: Spectrum of the disease[J]. Giuseppe Maggiore,Silvia Nastasio,Marco Sciveres.  World Journal of Hepatology. 2014(07)
[3]Hepatocellular carcinoma in patients with autoimmune hepatitis[J]. Andreas Teufel,Arndt Weinmann,Catherine Centner,Anja Piendl,Ansgar W Lohse,Peter R Galle,Stephan Kanzler.  World Journal of Gastroenterology. 2009(05)
[4]Aetiopathogenesis of autoimmune hepatitis[J]. Diego Vergani,Giorgina Mieli-Vergani.  World Journal of Gastroenterology. 2008(21)
[5]Low-dose tacrolimus ameliorates liver inflammation and fibrosis in steroid refractory autoimmune hepatitis[J]. Fin Stolze Larsen,Ben Vainer,Martin Eefsen,Peter Nissen Bjerring,Bent Adel Hansen.  World Journal of Gastroenterology. 2007(23)
[6]Hepatitis A vaccine associated with autoimmune hepatitis[J]. PA Berry,G Smith-Laing.  World Journal of Gastroenterology. 2007(15)



本文编号：2906471