体内筛选和功能验证胰腺癌肺转移的关键基因

发布时间：2020-12-14 17:40

　　目的：利用混合多克隆细胞亚群裸鼠体内实验和基因组PCR的方法进行筛选和验证具有肺转移能力的细胞亚群、相关候选基因以及遗传通路,为进一步研究恶性肿瘤转移的分子机理打下基础,为胰腺癌的临床诊断、治疗以及预防提供新的策略和靶点。方法：分别培养实验室前期得到的45个胰腺癌肺转移细胞克隆,待细胞生长至对数生长期时,取1×105个细胞/克隆,将45个细胞克隆混合为多克隆细胞亚群。混合细胞扩增培养后,在第一轮的动物筛选试验中,通过尾静脉的注射方式接种混合的多克隆细胞亚群到裸鼠体内,1×106个细胞/只,裸鼠分为通过饮水给予强力霉素（Doxycycline, Dox）实验组和普通饮水对照组,每组8只。待裸鼠出现濒死体征时,取其肺组织（含转移灶）原代培养肺转移细胞亚群,提取其基因组DNA进行PCR分析,比较两组裸鼠特异基因检出率在第二轮的动物筛选试验中,分别通过尾静脉和腹腔注射2种方式接种裸鼠,1×106个细胞/只,每种接种方式又分为给予强力霉素实验组和普通饮水对照组,每组8只,余操作（原代培养、基因组PCR）同第一轮动物筛选实验。结果：本实验通过两轮动物体内筛选具有高转移特性的胰腺癌细胞株,经原代培养... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
英文摘要
前言
实验材料
    1. 细胞株
    2. 实验动物
    3. 主要耗材
    4. 主要试剂
    5. 引物
    6. 主要仪器设备
    7. 主要溶液及配制
实验方法
    1. 细胞培养
    2. 动物接种
    3. 原代培养
    4. 高转移细胞株基因组DNA的提取
    5. 基因组PCR
    6. 细胞总RNA的提取
    7. 实时荧光定量PCR验证强力霉素对SQSTM1的调控作用
    8. Western Blot验证强力霉素对SQSTM1的调控作用
    9. 细胞划痕实验检测M7的迁移能力
    10. 细胞增殖实验检测M7细胞株的生长特性
实验结果
    1. 多克隆混合细胞亚群体内移植后动物存活情况
    2. 多克隆混合细胞亚群体内移植后肺转移情况
    3. 原代培养所得胰腺癌高转移细胞株
    4. 提取的基因组DNA质量检测结果
    5. 基因组PCR筛选胰腺癌肺转移关键基因
    6. 验证强力霉素对SQSTM1的调控作用
    7. 细胞划痕实验
    8. 细胞增殖实验
讨论
总结
参考文献
综述
    参考文献
实验流程图
缩略语表
个人简历
致谢



本文编号：2916751