乙型肝炎病毒对细胞色素P450同工酶3A4表达的影响

发布时间：2020-12-15 10:15

　　目的 探讨慢性HBV感染对人肝脏CYP3A4的影响，同时在细胞和分子水平对临床研究结果进行机制研究。方法 收集慢性HBV感染患者和正常人的肝组织标本，用HPLC方法检测CYP3A4代谢活性。以Western印迹法测定CYP3A4蛋白的表达差异。选取1a，25-（OH）₂D₃为诱导剂，观察其在mRNA和蛋白水平对HepG2细胞CYP3A4的诱导，并瞬时转染pcDNA₃-X质粒，观察HBx对诱导的影响。结果 慢性HBV感染组CYP3A4酶蛋白代谢活性和蛋白表达均低于正常组（P＜0.05）。1a，25-（OH）₂D₃作为诱导剂可在mRNA和蛋白水平对HepG2细胞CYP3A4表达有较好的诱导作用，HBx干扰1a，25-（OH）₂D₃对HepG2细胞CYP3A4的诱导。结论 慢性HBV感染可降低肝组织中CYP3A4的酶蛋白表达和酶活性，对CYP3A4活性的影响不涉及Km；HBx可抑制CYP3A4表达调控。 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

超低温冷冻复苏肝细胞(HH一03一011)

肝组织离体后迅速冷冻，冰冻切片显示肝细胞形态和结构正常。(图1)解冻后肝组织制备成微粒体，以不同浓度的翠酮为底物检测CY3A4酶活性，证实酶活性保存完好。(图2)图1超低温冷冻复苏肝细胞(HH一03一011)图2人肝细胞CYP45o3从酶活性(HH·03一011)二、人肝细胞色素P4503A4酶活性分析方法的建立和验证CYP3A4可催化翠酮的6一B轻化反应，以HPLC方法可将该产物分离出来，从而计算出酶代谢活力。我们建立的技术平台性能稳定，符合美国FDA的标准

相应浓度为横坐标(x)，用Agelinin.00化学工作软件进行线性回归，求得标准方程:y=37.1605x6一1.21757，r:0月9986。结果证明，6B一轻基攀酮在.0064一4.125uM浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。(图4;表2)表2.CYP3A4酶动力计算表(标准品6B一经基翠酮)ProductInjectionFinalPeakAieaBaekErrorConeentrationVolumeInucbationat247nmCaleulation(%)恤M)伍l)Concentration恤M)129258516.03加125.0.0.01.420000000口勺尸勺﹃勺.勺口勺︸勺口勺伽M)0.0641.816383.942038.2118616.426836.526274.6711152.71290.081640.138850.253750.474811.015692.042184.1423127.577.63一1.65一7.98一1.39一0.860.42尹O，)︸勺1()3)6之5]:0厂.01.42图4翠酮的代谢产物6B一轻基攀酮浓度与高效液相峰面积的线性方程直线相关公式曲线四、各样本CYP3A4酶代谢米氏方程曲线翠丸酮由cYP3A4代谢生成6p一经基翠丸酮，高效液相色谱(HPLC)法检测6B一轻基翠丸酮生成量，内标校正后绘制出每个样本CYP3A4酶代谢米氏方程曲线，得出最大反应速度(mVx)a和米氏常数(凡)。反应酶活力的指标琉xa两组差异有显著性P(=.003)，而酶系特征性常数瓜值两组无显著差异P(=0.103)。(图5，6;表3)


本文编号：2918106