基底硬度对肝细胞胞间粘附复合物稳定性影响的实验研究
发布时间：2020-12-18 06:30
目的通过比较分析不同硬度基底上的融合生长肝细胞（L02）的差异，探查细胞间粘附复合物稳定性不同的成因，加深微观力学环境改变对细胞群体生长行为及其表型影响的进一步认识。方法构建细胞体外培养模型，制备聚乙烯醇水凝胶基底膜，硬度分别为3.6kPa、10kPa、30kPa。分别对应正常的肝组织、纤维化中期的肝组织和纤维化末期的肝组织的硬度。运用实时显微拍摄观察在不同硬度基底上L02细胞的形态特征；应用免疫荧光染色技术检测不同硬度基底上的细胞肌动蛋白骨架构象、β-连环蛋白和vinculin表达分布；采用Western Blotting方法检测不同硬度基底的细胞膜上β-连环蛋白的表达及细胞质中vinculin的表达和β-连环蛋白的磷酸化水平。结果基底硬度对L02细胞的生物学行为具有重要影响。（1）融合生长的L02细胞呈圆形或多边形，随基底硬度增加，L02细胞的球形指数增大。（2）采用EDTA处理汇合生长的L02细胞，细胞逐渐分离，形态学表现现为细胞逐渐变圆，铺展面积和细胞周长逐渐缩小。随着硬度增大，L02细胞从融合状态到细胞-细胞间连接被破坏所需的时间依次变短。（3）融合生长的L02细胞在软基质上...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞连接类型Fig1.1Typeofcellconnection
图 1.2 粘附连接复合物结构Fig1.2 Diagram of adhesion complexes structure.1.2 细胞-细胞间粘附系统的功能粘附连接复合物对维持相邻细胞间的粘着接触以及调节肌动蛋白骨架，以上皮细胞的正常作用有重要作用。粘附连接复合物最重要的作用是它们有助于维持组织的完整性[13]。即加强中细胞-细胞间的内聚力，这个作用在早期的胚胎发育中最重要。用突变体的素转染到早期非洲爪蟾蜍胚胎中，导致了其组织完整性丧失，包括了胚胎外的不连续性和胚叶细胞的相互分离。而观察到胚叶细胞的大量分离就证明了间粘附减弱。大量关于粘附连接复合物不稳定的类似研究表明，它们与细胞粘附强度以及细胞间粘附连接的稳定性有密切关系。粘附连接复合物的第二功能是参与细胞分选和细胞间的识别。发育的基本是细胞有能力从与其不同的细胞中分离出来。通过 Townes 和 Holtfreter 的实验可证明，来自分离的原肠胚阶段的细胞能重组，这些细胞能够重新排列
不同位点(丝氨酸或者苏氨酸)能在酪氨酸激酶作用下被磷酸化，从而改变了β-连环蛋白与E-钙粘素和α-连环蛋白的相互作用。β-连环蛋白有三个保守的酪氨酸残基142，489和654如图1.3，它们靠近钙粘素并且调节粘附连接复合物的完整性[22]。酪氨酸142是β-连环蛋白与α-连环蛋白连接位点上的残基。这个残基的磷酸化作用使α-连环蛋白与β-连环蛋白分离，最终导致粘附复合物的丧失，因此对调节粘附连接起着重要作用[23]。酪氨酸142是Fyn、活化的Fer和c-Met的靶向目标。酪氨酸489在Arm重复区N端的第2个螺旋处，通过Abl是其磷酸化导致β-连环蛋白从E-钙粘素上脱离。其中β-连环蛋白酪氨酸残基654(Tyr654)与E-钙粘素和β-连环蛋白亲和性有密切关系[24-25]。酪氨酸654在Arm重复区的第3个螺旋处，这个残基在β-连环蛋白中是保守的。一旦这一位点发生磷酸化（通过EGFR或者Src），β-连环蛋白将和E-钙粘素解离，导致整个胞连接丧失功能。图1.3 β-连环蛋白的磷酸化位点Fig1.3 Phosphorylation sites of β-catenin此外，大量证据说明肌动蛋白骨架对粘附复合物的稳定性起着关键性作用。通过观察看到肌动蛋白骨架在细胞间连接处与细胞间粘附复合物共定位[26-27]。细胞间粘附连接复合物位于细胞表面
【参考文献】：
期刊论文
[1]基底硬度与细胞因子TGF-β1协同作用对肝细胞表型的影响[J]. 王红兵,徐以娟,徐秋华,于光磊,邹小兵,杨力,白洁,杨雨,张持. 医用生物力学. 2012(06)
[2]基底硬度对肝细胞和肝癌细胞融合生长的影响[J]. 张荣,王红兵,杨本艳姿,谭乔燕,杨力. 医用生物力学. 2013(01)
[3]基底硬度和表面形貌对细胞生物学行为的影响[J]. 王红兵,林雨,杨力,邹小兵,吴泽志. 细胞生物学杂志. 2009(05)
[4]β连环蛋白与肝癌[J]. 邓辉洲. 肝胆外科杂志. 2004(01)
[5]整合素及其与气道高反应的关系[J]. 向阳,秦晓群. 国外医学(生理、病理科学与临床分册). 2003(02)
[6]整合素在细胞响应机械应力中的作用[J]. 张惠静,蔡绍皙,卢晓. 生物化学与生物物理进展. 2002(03)
本文编号：2923536
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞连接类型Fig1.1Typeofcellconnection
图 1.2 粘附连接复合物结构Fig1.2 Diagram of adhesion complexes structure.1.2 细胞-细胞间粘附系统的功能粘附连接复合物对维持相邻细胞间的粘着接触以及调节肌动蛋白骨架，以上皮细胞的正常作用有重要作用。粘附连接复合物最重要的作用是它们有助于维持组织的完整性[13]。即加强中细胞-细胞间的内聚力，这个作用在早期的胚胎发育中最重要。用突变体的素转染到早期非洲爪蟾蜍胚胎中，导致了其组织完整性丧失，包括了胚胎外的不连续性和胚叶细胞的相互分离。而观察到胚叶细胞的大量分离就证明了间粘附减弱。大量关于粘附连接复合物不稳定的类似研究表明，它们与细胞粘附强度以及细胞间粘附连接的稳定性有密切关系。粘附连接复合物的第二功能是参与细胞分选和细胞间的识别。发育的基本是细胞有能力从与其不同的细胞中分离出来。通过 Townes 和 Holtfreter 的实验可证明，来自分离的原肠胚阶段的细胞能重组，这些细胞能够重新排列
不同位点(丝氨酸或者苏氨酸)能在酪氨酸激酶作用下被磷酸化，从而改变了β-连环蛋白与E-钙粘素和α-连环蛋白的相互作用。β-连环蛋白有三个保守的酪氨酸残基142，489和654如图1.3，它们靠近钙粘素并且调节粘附连接复合物的完整性[22]。酪氨酸142是β-连环蛋白与α-连环蛋白连接位点上的残基。这个残基的磷酸化作用使α-连环蛋白与β-连环蛋白分离，最终导致粘附复合物的丧失，因此对调节粘附连接起着重要作用[23]。酪氨酸142是Fyn、活化的Fer和c-Met的靶向目标。酪氨酸489在Arm重复区N端的第2个螺旋处，通过Abl是其磷酸化导致β-连环蛋白从E-钙粘素上脱离。其中β-连环蛋白酪氨酸残基654(Tyr654)与E-钙粘素和β-连环蛋白亲和性有密切关系[24-25]。酪氨酸654在Arm重复区的第3个螺旋处，这个残基在β-连环蛋白中是保守的。一旦这一位点发生磷酸化（通过EGFR或者Src），β-连环蛋白将和E-钙粘素解离，导致整个胞连接丧失功能。图1.3 β-连环蛋白的磷酸化位点Fig1.3 Phosphorylation sites of β-catenin此外，大量证据说明肌动蛋白骨架对粘附复合物的稳定性起着关键性作用。通过观察看到肌动蛋白骨架在细胞间连接处与细胞间粘附复合物共定位[26-27]。细胞间粘附连接复合物位于细胞表面
【参考文献】：
期刊论文
[1]基底硬度与细胞因子TGF-β1协同作用对肝细胞表型的影响[J]. 王红兵,徐以娟,徐秋华,于光磊,邹小兵,杨力,白洁,杨雨,张持. 医用生物力学. 2012(06)
[2]基底硬度对肝细胞和肝癌细胞融合生长的影响[J]. 张荣,王红兵,杨本艳姿,谭乔燕,杨力. 医用生物力学. 2013(01)
[3]基底硬度和表面形貌对细胞生物学行为的影响[J]. 王红兵,林雨,杨力,邹小兵,吴泽志. 细胞生物学杂志. 2009(05)
[4]β连环蛋白与肝癌[J]. 邓辉洲. 肝胆外科杂志. 2004(01)
[5]整合素及其与气道高反应的关系[J]. 向阳,秦晓群. 国外医学(生理、病理科学与临床分册). 2003(02)
[6]整合素在细胞响应机械应力中的作用[J]. 张惠静,蔡绍皙,卢晓. 生物化学与生物物理进展. 2002(03)
本文编号：2923536
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