乙型肝炎病毒（HBV）小鼠模型构建的研究

发布时间：2020-12-20 16:47

　　目的1.水动力法构建HBV持续复制型小鼠模型及其鉴定2.利用Cre-loxP重组系统建立诱导型HBV表达系统并制备诱导型HBV转基因小鼠方法1.HBV持续复制型小鼠模型的建立（1）HBV1.3-56质粒的鉴定：含1.3拷贝HBV基因组（血清型adw,基因型B）的质粒HBV1.3-56（本实验室保管）酶切及测序鉴定后转染Huh7肝癌细胞系,ELISA方法检测HBsAg.HBeAg的分泌表达水平；Southern Blot检测HBV复制；Northern Blot检测HBV转录。（2）HBV持续复制型小鼠模型的建立：利用水动力法将HBV1.3-56质粒、阳性对照1.3HBV质粒（血清型ayw,基因型DE重组型）经尾静脉注射入BALB/c小鼠体内,注射后每周收集小鼠血清至第16周,ELISA检测HBsAg.HBeAg表达水平；注射后第3天、7天、10天、14天和19天处死部分小鼠取肝脏,Southern Blot检测HBV复制水平, Northern Blot检测HBV转录水平。2.诱导型HBV表达系统的建立及其转基因小鼠的制备（1）诱导型HBV表达系统的构建：基于Cre-loxP重组系统和... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HBV基因结构图

图2. HBV复制周期HBV分型乙肝病毒目前根据表面抗原（HBsAg) —个共同抗原决定簇a和2对亚决定族d/y及w/r分为四个血清型：adw，adr, ayw，ayr, HBsAg 226个残基中第122位的赖氨酸/精氨酸残基决定了亚抗原决定簇d/y，第160位的赖氨酸/精氨酸残基决定了亚抗原决定簇w/r[10,ll]。但这一分型仅根据病毒外膜蛋白，并不能真正反映病毒基因组的差异。因此经过许多学者的努力，确定了根据HBV全序列差异性28%将HBV分型的方法，目前已确定A-H八个基因型[12-15]。HBV基因型分布有明显的地域特点。我国以B、C型为主[16]。HBV动物模型研究虽然目前HBV研究己经取得了很大进展，但是由于缺乏合适的动物模型，

内注射入小鼠体内，瞬间产生的液体压力超过心输出量，会使质粒溶液通过下腔静脉并以血液循环反方向通过门静脉进入肝脏，在其中表达（图3) [32,33]。虽然短时间内液体超负荷进入小鼠体内会导致小鼠心脏瞬间功能失调以及肝组织中血压剧增、细胞膨胀以及结构变形，但是小鼠的存活和生长不受其影响[32,34]。其他载体介导方法相比，该方法简便、快速、有效且肝祀向性好，且在一些文献报道中，基因可在水动力注射处理过的动物体内持续表达[35-37],在基因功能和基因治疗领域得到了广泛应用。通过该方法，HBVDNA不整合到小鼠基因组中，在肝脏中产生的病毒和病毒产物会引起宿主免疫反应，有利于研究病毒4


本文编号：2928207