基因修饰胎肝干细胞治疗肝纤维化的实验研究
发布时间：2020-12-24 09:34
研究背景:肝纤维化是肝脏受到慢性损伤时,肝脏细胞外基质分泌与降解失衡,从而在肝细胞的间隙可逆性沉积的结果;是多种肝脏疾病发展至肝硬化的必经阶段;成为诸多肝脏疾病预后与转归的关键。因此,抑制甚至逆转肝纤维化的进展,具有重要意义。多年来,抗肝纤维化的药物层出不穷,但是至今尚未出现理想的治疗药物。近年来以细胞为基础的肝病治疗方面的研究逐渐深入,目前研究较多的是骨髓间充质干细胞、脐带血干细胞及早期胚囊来源的干细胞、中期妊娠的胚胎肝脏来源的干细胞等。干细胞免疫原性低,移植后排斥反应小,更易于基因修饰。胎肝来源的肝母细胞,在治疗肝病方面,具有“天然”优势:移植后靶向性强,在受体肝脏中更容易向肝实质细胞分化。中期妊娠的胎肝肝母细胞含量丰富,它们具有向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的潜能。另外肝纤维化相关因子的基因治疗也呈现出良好前景。从肝母细胞含量丰富的大鼠中期妊娠（ED14.5）的胚胎肝脏中,以机械分离法、OX43/OX44免疫吸附法等分离纯化出肝母细胞并对其进行鉴定;细胞培养:体外培养肝母细胞,分析SCF、bFGF、EGF和LIF等细胞因子对肝母细胞增殖和分化的影响,选出既能刺激肝母细胞增殖同时又...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
从大鼠ED14.5胎肝细胞悬液中分离纯化出的肝母细胞悬
Ⅲ 孵育：在葡萄糖-6-磷酸钠盐作用液中 37℃孵育 30 min。Ⅳ 冲洗：自来水冲洗后用 DDW 冲洗。Ⅴ 显色：0.5%硫化铵作用 1 min，DDW 冲洗。Ⅵ 封片：甘油明胶封片。Ⅶ 镜检。2. 结果2.1 大鼠肝母细胞体外分离纯化及鉴定2.1.1 大鼠肝母细胞分离纯化显微镜观察结果显示：肝细胞悬液中细胞成分复杂，细胞大小形态不均匀，可见包括成纤维样细胞在内的多种细胞，并有少量细胞团。如图 1-A纯化后，细胞呈现较好的离散状态，细胞呈小圆亮。较纯化前，细胞形态均一；细胞较纯化前以小细胞为主，这些小细胞在体积上又可分为大、中、小三种。如图 1-B
吉 林 大 学 博 士 学 位 论 文结果提示，纯化前，胎肝细胞悬液中细胞成分复杂，经过纯化，细胞成分趋向单一，细胞外形具有肝脏祖细胞的特征。这些细胞虽然具有小亮圆的共同特征，但是体积并不完全一致，这提示 ED14.5 大鼠胎肝中的肝母细胞处于不同的分化阶段。2.1.2 大鼠肝母细胞纯化后鉴定纯化后大鼠肝母细胞细胞爬片的免疫组化鉴定，结果显示：2.1.2.1 约 95%的大鼠肝母细胞 AFP 免疫组化染色呈棕色颗粒浓染，为强阳性；另有不到 5%的大鼠肝母细胞染色较淡，为弱阳性。阳性细胞满视野。如图 1-C/图 1-D
【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterization of hepatic progenitors from human fetal liver using CD34 as a hepatic progenitor marker[J]. Parveen Nyamath,Ayesha Alvi,Aejaz Habeeb,Sanjeev Khosla,Aleem A Khan,CM Habibullah. World Journal of Gastroenterology. 2007(16)
[2]人胎肝干细胞体外分离、培养及鉴定[J]. 高沿航,李玉林,李艳茹,吴珊,全成实,王芯蕊,张丽红. 临床肝胆病杂志. 2007(01)
[3]大鼠胚胎肝干细胞的分离方法比较[J]. 胡小波,曲丽梅,李玉林. 中国实验诊断学. 2006(10)
[4]Therapeutic effect of interleukin-10 on CCI4-induced hepatic fibrosis in rats[J]. Yue-Hong Huang, Mei-Na Shi, Wei-Da Zheng, Li-Juan Zhang, Zhi-Xin Chen, Xiao-Zhong Wang, Department of Gastroenterology, Union Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350001, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(09)
[5]肝细胞生长因子对慢性肝损伤时肝部分切除术后肝再生和肝功能的影响[J]. 左国杰,杨立群,文莉,陈光,张福君. 中国实验诊断学. 2005(04)
[6]Effect of IL-10 on the expression of HSC growth factors in hepatic fibrosis rat[J]. Mei-Na Shi, Wei-Da Zheng, Li-Juan Zhang, Zhi-Xin Chen, Xiao-Zhong Wang, Department of Gastroenterology, Union Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350001, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(31)
[7]Adeno-associated virus mediated interferon-gamma inhibits the progression of hepatic fibrosis in vitro and in vivo[J]. Miao Chen, Guang-Ji Wang, Yong Diao, Hai-Tang Xie, Xin-Yan Li, Jian-Guo Sun, Jiangsu Key Lab of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, China Pharmaceutical University, No.24 Tongjiaxiang, Nanjing 210009, Jiangsu Province, China Rui-An Xu, Gene Therapy Laboratory, Genome Research Center, The University of Hong Kong, 8S-01, Kadoorie BioScience Bldg, Pokfulam Road, Hong Kong, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(26)
[8]人胎儿肝干细胞的分离及鉴定[J]. 张金卷,杜智,李涛,朱争艳,王毅军,聂福华,宋继昌. 天津医药. 2005(05)
[9]慢性重型肝炎患者血清肝细胞生长因子浓度变化的动态观察[J]. 张迁,万谟彬,李成忠,张斌,薛建亚,陈志辉. 临床肝胆病杂志. 2003(01)
[10]反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响[J]. 蒋炜,王吉耀,杨长青,王逸青,刘文滨,贺伯明. 中华医学杂志. 2002(17)
本文编号：2935417
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
从大鼠ED14.5胎肝细胞悬液中分离纯化出的肝母细胞悬
Ⅲ 孵育：在葡萄糖-6-磷酸钠盐作用液中 37℃孵育 30 min。Ⅳ 冲洗：自来水冲洗后用 DDW 冲洗。Ⅴ 显色：0.5%硫化铵作用 1 min，DDW 冲洗。Ⅵ 封片：甘油明胶封片。Ⅶ 镜检。2. 结果2.1 大鼠肝母细胞体外分离纯化及鉴定2.1.1 大鼠肝母细胞分离纯化显微镜观察结果显示：肝细胞悬液中细胞成分复杂，细胞大小形态不均匀，可见包括成纤维样细胞在内的多种细胞，并有少量细胞团。如图 1-A纯化后，细胞呈现较好的离散状态，细胞呈小圆亮。较纯化前，细胞形态均一；细胞较纯化前以小细胞为主，这些小细胞在体积上又可分为大、中、小三种。如图 1-B
吉 林 大 学 博 士 学 位 论 文结果提示，纯化前，胎肝细胞悬液中细胞成分复杂，经过纯化，细胞成分趋向单一，细胞外形具有肝脏祖细胞的特征。这些细胞虽然具有小亮圆的共同特征，但是体积并不完全一致，这提示 ED14.5 大鼠胎肝中的肝母细胞处于不同的分化阶段。2.1.2 大鼠肝母细胞纯化后鉴定纯化后大鼠肝母细胞细胞爬片的免疫组化鉴定，结果显示：2.1.2.1 约 95%的大鼠肝母细胞 AFP 免疫组化染色呈棕色颗粒浓染，为强阳性；另有不到 5%的大鼠肝母细胞染色较淡，为弱阳性。阳性细胞满视野。如图 1-C/图 1-D
【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterization of hepatic progenitors from human fetal liver using CD34 as a hepatic progenitor marker[J]. Parveen Nyamath,Ayesha Alvi,Aejaz Habeeb,Sanjeev Khosla,Aleem A Khan,CM Habibullah. World Journal of Gastroenterology. 2007(16)
[2]人胎肝干细胞体外分离、培养及鉴定[J]. 高沿航,李玉林,李艳茹,吴珊,全成实,王芯蕊,张丽红. 临床肝胆病杂志. 2007(01)
[3]大鼠胚胎肝干细胞的分离方法比较[J]. 胡小波,曲丽梅,李玉林. 中国实验诊断学. 2006(10)
[4]Therapeutic effect of interleukin-10 on CCI4-induced hepatic fibrosis in rats[J]. Yue-Hong Huang, Mei-Na Shi, Wei-Da Zheng, Li-Juan Zhang, Zhi-Xin Chen, Xiao-Zhong Wang, Department of Gastroenterology, Union Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350001, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2006(09)
[5]肝细胞生长因子对慢性肝损伤时肝部分切除术后肝再生和肝功能的影响[J]. 左国杰,杨立群,文莉,陈光,张福君. 中国实验诊断学. 2005(04)
[6]Effect of IL-10 on the expression of HSC growth factors in hepatic fibrosis rat[J]. Mei-Na Shi, Wei-Da Zheng, Li-Juan Zhang, Zhi-Xin Chen, Xiao-Zhong Wang, Department of Gastroenterology, Union Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350001, Fujian Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(31)
[7]Adeno-associated virus mediated interferon-gamma inhibits the progression of hepatic fibrosis in vitro and in vivo[J]. Miao Chen, Guang-Ji Wang, Yong Diao, Hai-Tang Xie, Xin-Yan Li, Jian-Guo Sun, Jiangsu Key Lab of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, China Pharmaceutical University, No.24 Tongjiaxiang, Nanjing 210009, Jiangsu Province, China Rui-An Xu, Gene Therapy Laboratory, Genome Research Center, The University of Hong Kong, 8S-01, Kadoorie BioScience Bldg, Pokfulam Road, Hong Kong, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(26)
[8]人胎儿肝干细胞的分离及鉴定[J]. 张金卷,杜智,李涛,朱争艳,王毅军,聂福华,宋继昌. 天津医药. 2005(05)
[9]慢性重型肝炎患者血清肝细胞生长因子浓度变化的动态观察[J]. 张迁,万谟彬,李成忠,张斌,薛建亚,陈志辉. 临床肝胆病杂志. 2003(01)
[10]反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响[J]. 蒋炜,王吉耀,杨长青,王逸青,刘文滨,贺伯明. 中华医学杂志. 2002(17)
本文编号：2935417
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