基于CRISPR/Cas9系统的非酒精性脂肪性肝病脂质贮积机制研究

发布时间：2020-12-24 11:09

　　近年来,随着生活生平的提高和生活习惯的改变,非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）的患病率逐年升高,已成为全球性的公共卫生问题。NAFLD的疾病谱包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎及其相关肝硬化、肝细胞肝癌等。NAFLD的发生发展与肥胖、2型糖尿病、高血压等代谢性疾病关系密切,是遗传-环境-代谢应激相关性疾病,但其确切的发病机制并未明确。经典的“二次打击”学说并不能完全解释NAFLD的全部机制。NAFLD的发生是肝细胞不断贮积脂质的过程,从肝细胞脂质贮积的分子机制入手,将为NAFLD的发病机制研究提供新线索。肝细胞脂质贮积主要与脂质摄取、合成、分泌以及氧化清除相关。微囊蛋白1（Caveolin-1）是微囊的主要结构蛋白,也是一个多功能的信号蛋白。结合文献阅读和前期研究,我们推测caveolin-1的表达缺失可能通过增加脂肪酸摄取与合成,促进脂质贮积、介导炎症反应,加速NAFLD的发生发展。我们利用NAFLD小鼠和细胞模型,应用最新的基因编辑技术-CRISRP/Cas9系统以及重组慢病毒技术,干预caveolin-1表达。研究发现：... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

NAFLD中异常脂质Jfc积的病理生理机制[33]

酶既定了泛素化通路底物的特异性，因此傭选脂质It积相关E3连接酶，有现NAFLD中脂质代谢异常通路，开发潜在药物，具有重大的生物学意义应。制备caveolin-1和E3连接酶表达干预模型是开展其在NAFLD脂质j!&究的基碰。RNA干扰技术通过阻碍mRNA翻译降低基因表达，是常见的，但其致命缺点是无法彻底消除基因表达，而很多蛋白，尤其是酶活性蛋连接酶），其残余的表达往往足以发挥其活性，满足机体对它的功能需求。A干扰的效果不能长时间持续，我们在前期实验中发现，腺病毒介导的sh达和caveolin-1基因在肝脏的沉默效果只能持续10天左右（图2 )，而N鼠模型的诱导常常需要更久的时间。而反复多次注射腺病毒介导的shRN造成小鼠尾部损伤，还可诱发机体免疫清除，导致caveolin-1敲低小鼠N型构建失败。

图3. CRISPR/Cas9系统示意图网Cas9蛋白在sgRNAs的指导下对鞔位点进行切割，造成DNA双链断裂(doublestrand break, DSB )，细胞会立刻对DSB进行修复。在没有同源序列存在的情况下，

【参考文献】：
期刊论文
[1]Apolipoprotein B100 quality control and the regulation of hepatic very low density lipoprotein secretion[J]. Eric Fisher,Elizabeth Lake,Roger S McLeod.  The Journal of Biomedical Research. 2014(03)
[2]Upregulation of caveolin-1 and SR-B1 in mice with non-alcoholic fatty liver disease[J]. Yan Qiu,Shan Liu,Hong-Tan Chen,Chao-Hui Yu,Xiao-Dong Teng,Hong-Tian Yao,Guo-Qiang.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2013(06)
[3]新型BODIPY荧光探针的光谱性能研究[J]. 蒋琳,蔡丽波,周欢,王婵娟,章明芳,董琳,尹守春.  杭州师范大学学报(自然科学版). 2012(06)
[4]泛素连接酶的结构与功能研究进展[J]. 杨娜,侯巧明,南洁,苏晓东.  生物化学与生物物理进展. 2008(01)
[5]Caveolae/caveolin-1与细胞胆固醇转运[J]. 覃丽,廖端芳.  中国病理生理杂志. 2007(10)



本文编号：2935551