乳铁蛋白干扰EB病毒与宿主细胞的结合及抑制EB病毒感染性炎症的机制

发布时间：2021-01-08 22:06

　　乳铁蛋白（Lactoferrin, LF）是一种铁结合糖蛋白,属于转铁蛋白家族。乳铁蛋白主要由粘膜上皮细胞和多形核淋巴细胞产生,并分泌到乳汁、唾液、鼻腔粘膜分泌物、泪液、肠粘液、生殖道分泌物中。乳铁蛋白的生理功能广泛,包括维持铁稳态、广谱抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等。作为一种天然免疫分子,乳铁蛋白在预防病原微生物感染和抑制过度炎症反应方面发挥关键作用。EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）在人类广泛传播,是单核细胞增多症的病因,并与多种肿瘤的发生密切相关,如霍奇金病、伯基特淋巴瘤和鼻咽癌。EBV具有明显的亲B细胞嗜性。EB病毒能够选择性地黏附到B细胞表面,主要是通过病毒包膜糖蛋白与B细胞表面CD21分子（EB病毒的受体）之间的交互作用；进入细胞之后,EB病毒可使B细胞永生化。上皮细胞中也可检出EB病毒,其是潜在的致癌因素。新近研究发现,EBV能直接感染单核／巨噬细胞等多种免疫细胞,诱导细胞产生大量的炎症因子,在早期可起到抗感染作用,但过度的炎症反应可对器官造成损伤。我们的前期研究对18个湖南鼻咽癌高发家系进行了单体型分析和连锁分析,发现染色体3p21为鼻咽癌易感基因... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词简表
第一章 前言
    乳铁蛋白在鼻咽癌组织中显著下调，是鼻咽癌候选抑癌基因
    乳铁蛋白是一种分泌蛋白，是天然免疫系统的重要组成成分
    孰铁蛋白的抗病毒感染作用及机制
    乳铁蛋白抗炎作用机理及其意义
    EB病毒感染与鼻咽癌
    EB病毒感染与天然免疫
    科学假设
    技术路线
第二章 材料与方法
    1 材料
        1.1 细胞和细胞系
        1.2 病毒
        1.3 菌株和质粒
        1.4 试剂
        1.5 主要仪器
    2 方法
        2.1 外周血单个核细胞分离（密度梯度离心法,Ficoll法）
+B淋巴细胞">        2.2 磁珠分选CD19⁺B淋巴细胞
        2.3 THP1诱导成为巨噬细胞
        2.4 EB病毒的制备和滴度测定
        2.5 流式细胞术
        2.6 间接免疫荧光
        2.7 EB病毒DNA抽提
        2.8 细胞总RNA抽提
        2.9 消化RNA中痕量DNA
        2.10 逆转录
        2.11 实时荧光定量PCR（Real-time PCR）
        2.12 荧光原位杂交（FISH）
        2.13 质粒抽提（小量）
        2.14 表达载体的构建
        2.15 质粒DNA的转染
        2.16 siRNA的转染
        2.17 病毒DNA的转染
        2.18 CpG DNA处理细胞
        2.19 细胞蛋白的抽提
        2.20 BCA法测蛋白浓度
        2.21 免疫共沉淀
        2.22 Western blot
        2.23 荧光素酶报告活性检测
        2.24 统计学分析
第三章 结果
    第一部分 LF抑制EB病毒感染及其机制
        1.1 LF抑制EBV与B淋巴细胞的结合
        1.2 LF抑制EBV进入B淋巴细胞
        1.3 LF与CD21存在交互作用
        1.4 LF不影响B细胞中EBV的复制
        1.5 LF能抑制B淋巴细胞向鼻咽上皮细胞传递EBV
    第二部分 LF抑制EBV感染介导的炎症反应的机制
        2.1 LF通过降低NF-κB的活性抑制EBV诱导的IL-8和MCP-1表达上调
        2.2 LF通过与TLR2结合抑制TLR2介导的NF-κB的活化
        2.3 LF通过抑制EBV DNA对TLR9通路的诱导,而下调IL-8表达
        2.4 CD14促进EBV DNA诱导IL-8的表达
        2.5 LF具有抑制CD14促进EBV DNA诱导炎症反应的功能
        2.6 LF抑制CD14与TLR9的结合,进而抑制炎症反应
第四章 讨论
    第一部分 乳铁蛋白抑制EB病毒感染宿主细胞
    第二部分 乳铁蛋白抑制EB病毒感染性炎症的机制
结论
参考文献
综述一
    参考文献
综述二
    参考文献
致谢
攻读博士学位期间主要研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]乳铁蛋白与肿瘤关系的研究进展[J]. 李洪波,周强,滕国新,许晓曦.  食品工业科技. 2010(01)
[2]乳铁蛋白在肿瘤治疗中的作用机制[J]. 陈晓泓,张博恒.  复旦学报(医学版). 2010(01)
[3]细胞周期调控与肿瘤[J]. 邹向阳,李连宏.  国际遗传学杂志. 2006(01)

博士论文
[1]鼻咽癌发病不同阶段分子标志物的鉴定及差异表达基因相互作用网络的构建[D]. 张文玲.中南大学 2009
[2]染色体3p21鼻咽癌易感基因区LTF基因的筛查及其抑制鼻咽癌细胞增殖的功能研究[D]. 周艳宏.中南大学 2007
[3]Epstein-Barr病毒在Burkitt淋巴瘤细胞（Raji）染色体上整合的初步研究[D]. 高建明.中南大学 2006



本文编号：2965387