TLR2/4配体增强肝脏炎症促进模拟抗原诱发自身免疫性肝炎

发布时间：2021-01-14 00:07

　　目的:自身免疫性肝炎（AIH）的形成和发展是模拟抗原在自身免疫耐受减弱的情况下诱发自身免疫应答,从而导致慢性的肝脏炎症和纤维化。在AIH发病过程中,肝脏自身免疫耐受能力减弱的机制尚不清楚。本文拟研究腺病毒（Ad）和四氯化碳（CCl₄）诱发的非AIH炎症,是否能够促进模拟抗原诱发自身免疫应答和AIH,并探讨相关的免疫调节机制。方法:（1）尾静脉注射Ad、pCYP2D6、Ad/pCYP2D6、腹腔注射CCl₄并用CCl₄/pCYP2D6处理C57/BL6小鼠,HE染色检测肝组织中炎症细胞浸润;Real-time PCR检测肝组织中炎症相关基因Il1b、Il6和Tnfa的表达;观察Ad、CCl₄及CYP2D6单独作用在第5天、10天和15天时,是否能引起肝脏非AIH炎症;在第28天时,观察Ad/pCYP2D6或CCl₄/pCYP2D6实验组中是否有自身抗体产生。在非AIH炎症期间,尾静脉注射psTLR2/4质粒,封闭体内的TLR2/4的配体,Real-time PCR检测肝组织中炎症... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

动物实验流程图

我们首先分别通过尾静脉注射腺病毒（Ad）、模拟抗原人 CYP2D6 和腹腔注射四氯化碳（CCl4）处理小鼠（图 1-1）。HE 染色检测了肝脏淋巴细胞浸润及炎症情况，结果显示，与 Naive 对照组相比较，Ad 及 CCl4都能有效的诱导肝脏炎症的产生，然而，仅在肝脏转染表达模拟抗原人 CYP2D6 却无法引起肝脏炎症（图 1-2）。图 1-1：动物实验流程图按图所示时间点，小鼠尾静脉注射腺病毒 Ad（109pfu）、重组质粒 pCYP2D6（50 μg/次）以及 psTLR2/（100 μg/次），腹腔重复注射 CCl4（1 ml/kg）。

YP2D6 在肝脏中的表达水平（图 1-5），但是却能引起肝脏产生针对 CYP2D6体（anti-CYP2D6）和针对正常肝蛋白（hepatic protein，HP）的自身抗体（anti-HP而，单独在肝脏中转染表达 CYP2D6 只针对模拟抗原 CYP2D6 产生低滴度的，针对正常肝蛋白却无自身抗体产生（图 1-6）。为了探索 TLR2/4 配体在炎症产生和诱导自身免疫应答中的作用，我们通过转染的方法，在肝脏中转染表达了 TLR2/4 可溶性的受体（sTLR2/4）, 以此来相应的配体[40]。荧光定量PCR结果显示，当用TLR2/4可溶性受体封闭了TLR号后抑制了由 Ad 及 CCl4诱导的肝脏炎症反应，相应的炎症基因 Il1b、Il6 和 T表达上调被抑制（图 1-7）。重要的是，当我们用可溶性受体（sTLR2/4）封闭R2/4 的信号后，则抑制了抗 CYP2D6 抗体和抗自身肝蛋白抗体的产生（图 1-8综合以上所述结果，我们推测由 Ad 及重复注射 CCl4引起的持续肝脏非 A症导致了 TLR2/4 配体的释放，而释放的 TLR2/4 配体活化免疫细胞分泌促炎因子，这些细胞因子促进模拟抗原启动自身免疫应答。


本文编号：2975804