microRNA-21通过PTENT/Akt信号介导了转化生长因子-β引起的肝细胞上皮间质转化
发布时间：2021-01-23 01:19
目的肝纤维化是以细胞外基质的过多沉积为特征,细胞外基质的主要来源是激活的肝星状细胞。研究表明上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）在其中也起着重要的作用。EMT是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,其标志为上皮标志蛋白表达下降和间皮标志蛋白的表达升高。小RNA （microRNA,miR）是一类长度约22-28个核苷酸的非编码小分子RNA,其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用,参与了许多生理病理过程的调节。我们的前期工作表明miR-21在肝星状细胞激活过程中起着重要的作用。本研究的目的是探讨miR-21在人肝细胞株（QSG-7701）EMT中的作用和机理。方法1.TGF-β1对人肝细胞EMT的作用。用10ng/mlTGF-β1?刺激人肝细胞株QSG-7701细胞1、3、5、7天后,显微镜下观察细胞形态的变化,western blot检测上皮标志蛋白（E-钙粘蛋白）和间皮标志蛋白（N-钙粘蛋白、波形蛋白）的表达。2.TGF-β1刺激miR-21的表达。用10ng/mlTGF-β1?刺激人肝细胞株...
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TGF-e1刺激引起肝细胞上皮标志蛋白和间皮标志蛋白改变
，0-actin w0tk ipmnId 3d 5d 7d对照组 I 1TGF-0 11-2 TGF-e 1刺激引起肝细胞上皮标志蛋白和间皮标志蛋白改变F-e 1刺激人肝细胞株miR-21的表达上升。roRNA作为一类非编码小RNA，常在转录后水平调控IE基因。它参胞生理病理过程。近来发现它在脏器纤维化过程中也有一定的作用。1在肾脏、肺脏、心脏等脏器的纤维化过程中起的作用己有相关文献前期的工作表明miR-21在肝星状细胞的激活中起着重要的作用。但否与肝细胞EMT有关系仍不清楚。在本实验中，用终浓度为lOng/P 1作用QSG-7701细胞，分别在刺激第1、3、5、7天抽提总RNA，DNA，用Taqman探针法RT-PCR检测miR-21的表达情况。结果示：刺激第5天后，miR-21的表达较对照组有明显的升高（*P<0.05)(8 ■, *
的表达情况，进一步证实转染是否成功。结果显示miR-21抑制剂组较阴性对照组miR-21的表达明显下降（*P<0.05)(图3-1)。1-4 ： 木I IC 1-2 1 TI 士>。.6 ^ miM。4 “ iir j‘。2 E1 dn —TGF- 0 1+阴性对照TGF- e l"hniR-21抑制剂图3-1转染miR-21抑制剂后miR-21的表达2.MiR-21 介导了 TGF- P 1 的 EMT 作用。转染lOOnM miR-21抑制剂沉默miR-21后，用TGF-P 1刺激人肝细胞株QSG-7701 5天，用显微镜观察细胞形态，用western blot检测转染组及对照组上皮标志蛋白（E4丐粘蛋白）和间皮标志蛋白（N-韩粘蛋白、波形蛋白）。结果显示：(1)形态改变：miR-21抑制剂组较对照组性状更圆钝，触角更少，排列更紧密(图 3-2)。(2)上皮细胞标志蛋白（E-I丐粘蛋白）：miR-21抑制剂组较对照组表达升高（图3-3)。(3)间质细胞标志蛋白（N-韩粘蛋白、波形蛋白）：miR-21抑制剂组较对照组表达下降（图3-3)。以上结果提示下调miR-21表达后，部分阻断了 TGF-e 1致肝细胞EMT作用。28
本文编号：2994259
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TGF-e1刺激引起肝细胞上皮标志蛋白和间皮标志蛋白改变
，0-actin w0tk ipmnId 3d 5d 7d对照组 I 1TGF-0 11-2 TGF-e 1刺激引起肝细胞上皮标志蛋白和间皮标志蛋白改变F-e 1刺激人肝细胞株miR-21的表达上升。roRNA作为一类非编码小RNA，常在转录后水平调控IE基因。它参胞生理病理过程。近来发现它在脏器纤维化过程中也有一定的作用。1在肾脏、肺脏、心脏等脏器的纤维化过程中起的作用己有相关文献前期的工作表明miR-21在肝星状细胞的激活中起着重要的作用。但否与肝细胞EMT有关系仍不清楚。在本实验中，用终浓度为lOng/P 1作用QSG-7701细胞，分别在刺激第1、3、5、7天抽提总RNA，DNA，用Taqman探针法RT-PCR检测miR-21的表达情况。结果示：刺激第5天后，miR-21的表达较对照组有明显的升高（*P<0.05)(8 ■, *
的表达情况，进一步证实转染是否成功。结果显示miR-21抑制剂组较阴性对照组miR-21的表达明显下降（*P<0.05)(图3-1)。1-4 ： 木I IC 1-2 1 TI 士>。.6 ^ miM。4 “ iir j‘。2 E1 dn —TGF- 0 1+阴性对照TGF- e l"hniR-21抑制剂图3-1转染miR-21抑制剂后miR-21的表达2.MiR-21 介导了 TGF- P 1 的 EMT 作用。转染lOOnM miR-21抑制剂沉默miR-21后，用TGF-P 1刺激人肝细胞株QSG-7701 5天，用显微镜观察细胞形态，用western blot检测转染组及对照组上皮标志蛋白（E4丐粘蛋白）和间皮标志蛋白（N-韩粘蛋白、波形蛋白）。结果显示：(1)形态改变：miR-21抑制剂组较对照组性状更圆钝，触角更少，排列更紧密(图 3-2)。(2)上皮细胞标志蛋白（E-I丐粘蛋白）：miR-21抑制剂组较对照组表达升高（图3-3)。(3)间质细胞标志蛋白（N-韩粘蛋白、波形蛋白）：miR-21抑制剂组较对照组表达下降（图3-3)。以上结果提示下调miR-21表达后，部分阻断了 TGF-e 1致肝细胞EMT作用。28
本文编号：2994259
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2994259.html
最近更新
教材专著
