Pim-3对急性肝损伤肝细胞凋亡的抑制作用

发布时间：2021-01-25 17:17

　　目的运用流体力学基因转染方法,将已克隆的Pim-3基因转染进入大鼠的肝脏内并用LPS/D-GalN诱导急性肝损伤,观察转染后Bcl-2、p53等基因的表达变化及对肝细胞生长的影响。探讨Pim-3基因对急性肝损伤肝细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法32只大鼠随机分成四组（8只/组）。A组为正常对照组,B、C和D组分别以林格氏液、空载质粒和Pim-3基因重组质粒溶液预处理大鼠,1天后给予LPS/D-GalN腹腔内注射诱导急性肝损伤,8h后或濒死期处死大鼠,采集肝组织标本。利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白（GFP）表达水平;TUNEL分析检测细胞凋亡情况,并用底物显色法检测Caspase-3活性;肝组织基因表达通过RT-PCR和Western blot进行检测。结果1.固定后的肝组织冰冻切片在荧光显微镜下观察,C组和D组肝组织有大量GFP表达,而A组和B组则无GFP表达,表明质粒成功转染进入肝组织内,并在肝组织内出现高表达。2.肝组织TUNEL分析各组大鼠肝细胞凋亡指数（AI）,分别为:A组3.1%±1.7%、B组83.1%±12.6%、C组79.9%±13.4%和D组10.2%±6.9%,所有... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各组大鼠肝组织GFP表达情况（×200）

7008009001000in.mgm)图 3.3 各组大鼠肝组织切片细胞凋亡 TUNEL 分析（×200）A：正常对照组 B：林格氏液处理组 C：空载质粒转染组 D：Pim-3 基因转染组3.4 肝组织 Caspase-3 活性分析结果能过荧光分光光度计的检测（图 3.4），各组大鼠肝组织 Caspase-3 的别为：A 组 107.1±75.0 pmol/min.mg、B 组 728.8±185.8 pmol/min.mg、43.5±242.9pmol/min.mg 和 D 组 250.1±84.3 pmol/min.mg。经统计学处理，PS/D-GalN 攻击大鼠 Caspase-3 活性明显高于正常对照组，B 组和 C 组显 D 组（P<0.01），而 B 组和 C 组间差异无明显统计学意义（P>0.05）。这毒素攻击诱导了大鼠肝组织 Caspase-3 的活性，而 Pim-3 基因的转染则抑活性。

3.6 肝组织凋亡诱导基因 p53 的表各组大鼠肝组织 p53 mRNA 的0.57±0.38、B 组 1.17±0.71、C 组 1.23±D 组 p53 表达水平低于 A 组、B 和 C 组（但 B 和 C 组间差异无统计学意义（P>组织 p53 高表达，Pim-3 基因转染则抑M A B C Ds

【参考文献】：
期刊论文
[1]丝/苏氨酸激酶Pim-3基因对急性肝功能衰竭肝保护效应的实验研究[J]. 刘亮明,邓欢,张吉翔,罗杰,孙水林,尹东.  中华消化杂志. 2006(09)
[2]原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响[J]. 邓欢,刘亮明,张吉翔,罗杰,尹东,熊瑛,汤蕾,谢正元.  世界华人消化杂志. 2006(23)
[3]内毒素诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究[J]. 刘亮明,罗杰,张吉翔,邓欢,孙水林,熊高飞.  中华医学杂志. 2006(30)
[4]内毒素性急性肝损伤实验动物模型的建立[J]. 刘亮明,邓欢,张吉翔,罗杰.  世界华人消化杂志. 2006(01)
[5]丙型肝炎病毒蛋白对Bcl-10蛋白信号转导的影响[J]. 成军,刘妍,杨倩,王建军,洪源,王琳.  世界华人消化杂志. 2003(12)
[6]增殖细胞核抗原和c-erbB-2癌基因蛋白在乙肝病毒感染慢性肝病中表达的意义[J]. 洪丰,张宝玉,王万忠,石男,白守国.  临床肝胆病杂志. 1998(01)



本文编号：2999592