大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为具有低免疫原性的类肝细胞及其特性的实验研究

发布时间：2021-02-09 23:42

　　目的1.探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）体外诱导分化为类肝细胞（Heatocyte-like cells, HLCs）的可行性及方法。2.BM MSCs及HLCs分别与刀豆蛋白A （concanavalin A, ConA）刺激后的脾淋巴细胞（Lymphocyte, LYM）共培养,观察LYM增殖及转化生长因子β1（Transforming Growth Factor β1, TGF-β1）及白细胞介素6（Interleukin-6, IL-6）的表达情况。3.建立大鼠80%肝切除模型,通过门静脉BM MSCs移植,研究BM MSCs对大鼠自体80%肝切除残肝肝再生及修复作用的实验研究。方法1.采用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离、纯化、鉴定BM MSCs,运用改良体外肝分化培养体系诱导BM MSCs向HLCs分化。诱导后4周,观察细胞形态的变化；采用EILSA法检测诱导分化后HLCs上清液中白蛋白（Albumin, ALB）及尿素的分泌；RT-PCR检测肝细胞标志性基因甲胎蛋白（Alpha-Fetal Prot... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

体外细胞因子诱导后BMMSCs细胞形态的改变A：诱导前BMMSCs;B诱导后7天；C:诱导后14d;D：诱导后28天

粉数图1-4诱导后上清液中分泌白蛋白和尿素水平 M BMSCs DHC(7^) DHC(14^) DHC(21^) DH 0(28^)图1 -5对照组和诱导分化组HLCs细胞肝特异性蛋白AFP、ALB .CK-18 mRNA表达1.2.3 BMMSCs与ConA刺激后的LYM共培养：LYM组：不加入ConA的LYM增殖较慢，可见少量集落团，LYM+ConA组：经ConA刺激LYM后，见LYM明显增殖活跃，呈集落增殖，见图（6; A、C) ； BM MSCs+LYM+ConA组：见增殖集落明显减少，混合LYM增殖明显受到抑制，（见图6; B)。收集培养液上清检测TGF-p丨、IL-6水平，其中：BM MSCs+LYM+CcmA组与③ LYM+ConA组相比，TGF-pi水平明显升高

达RT-PCR分析表明诱导分化7 d后细胞表达AFP基因,ALB基因，表达逐渐增强。这表明诱导出的多角形贴壁细胞是分化中的HLCs，（见图1-5);■■图1-3体外细胞因子诱导后BM MSCs细胞形态的改变A：诱导前BMMSCs; B诱导后7天；C:诱导后14d; D：诱导后28天1 1

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3026423