血小板微粒通过诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成参与炎症性肠病炎症机制的研究
发布时间：2021-02-11 18:11
背景与目的肠道粘膜免疫反应功能失调被认为是炎症性肠病（IBD）发病机制中的重要环节,其中损伤相关分子模式（DAMPs）激发肠道免疫炎症损伤这一机制得到广泛关注。血小板微粒（PMPs）作为血小板活化后的重要产物,可表达多种重要的DAMPs信号。研究表明PMPs在系统性硬化症中表现出诱导中性粒细胞产生中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的能力,其是否参与IBD炎症损伤机制尚不清楚,因此探讨PMPs对于肠道炎症影响及其可能机制对于IBD的防治具有重要的理论意义。本研究旨在探讨炎症性肠病中PMPs的表达情况及其与疾病活动程度的关联,并分析PMPs对DSS诱导结肠炎症的影响及其可能机制。方法1、招募118例IBD确诊患者及35例健康对照,分为溃疡性结肠炎组（UC组,n=54）、克罗恩病组（CD组,n=64）及健康对照组（HCs组,n=35）,采集标本,应用多参数（CD61、膜联蛋白V）流式细胞术检测PMPs含量,通过统计学方法分析PMPs表达与疾病活动度的关联。2、收集IBD患者肠管严重病损部位及正常部位的肠粘膜标本,使用免疫荧光法标记,在激光扫描共聚焦显微镜（LCSM）下观察用于标记PMPs的CD...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PMPs流式细胞术检测结果横坐标表示异硫氰酸荧光素（FITC），纵坐标表示藻红蛋白（PE）
安徽医科大学硕士学位论文25图2不同来源的PMPs表达水平与正常对照组相比，UC及CD患者外周血中PMPs表达水平增加，具有统计学意义（P<0.05）。UC及CD组患者中PMPs增加程度无明显不同（P＞0.05）。5.1.3血浆中PMPs表达与IBD疾病活动之间的相关性分析在UC患者中，轻度、中度、重度PMPs表达水平分别为1832.94±1746.09/μL，2097.68±1581.15/μL及5291.17±3730.62/μL（图3）。如图，轻度与中度组间无差异（P＞0.05），轻度与重度、中度与重度组间存在差异（P＜0.05），差异具有统计学意义。在CD患者中，缓解期、轻度、中度及重度PMPs水平分别为1831.00±1009.17/μL，1858.56±1642.68/μL，2648.45±2365.78/μL及6164.44±2728.23/μL（图4）。如图，缓解期与重度、轻度与重度、中度与重度组间存在差异（P<0.05），其余组间无明显差异，差异具有统计学意义。
安徽医科大学硕士学位论文27伤变形，腺体融合或被大量炎性细胞浸润，尤其是UC组结肠隐窝脓肿处CD61表达明显增强。图5-APMPs在IBD肠粘膜中的表达（×40倍镜）图中蓝色为DAPI标记的DNA，红色为Cy5标记的CD61。正常对照（NC）组中，肠粘膜上皮组织大致正常，腺体结构完整，可见少量CD61表达。在CD组及UC组中，CD61表达明显增加，可见肠粘膜部分上皮损伤变形，腺体融合或被大量炎性细胞浸润，尤其是UC组结肠隐窝脓肿处CD61表达明显增强。5.2.2NETs在IBD肠粘膜中的表达与分布为观察肠粘膜局部是否有NETs形成，我们对各组的结肠组织进行预处理后，使用DAPI、MPO及H3多重免疫荧光染色，仅在某例重症UC患者的结肠标本局部见到如下图（图5-B）结构，中性粒细胞胞核扭曲解旋，颗粒蛋白MPO粘附在外放的染色质中，MPO和DNA便出现共定位，考虑系NETs形成。图5-BPMPs在IBD肠粘膜中的表达（×63倍油镜）图中蓝色为DAPI标记的DNA，绿色为FITC标记的髓过氧化物酶（MPO），红色为AlexaFluor555标记的组蛋白Histone3（H3）。中性粒细胞胞核扭曲解旋，颗粒蛋白MPO粘附在外放的染色质中，MPO和DNA便出现共定位，考虑系NETs形成。5.3PMPs诱导中性粒细胞释放NETs
【参考文献】：
期刊论文
[1]炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018年·北京）[J]. 吴开春,梁洁,冉志华,钱家鸣,杨红,陈旻湖,何瑶. 中国实用内科杂志. 2018(09)
[2]慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中血小板及内皮细胞微粒变化的探讨[J]. 但小苹,邱倩,杨再兴,焦燕,熊玮. 第三军医大学学报. 2013(24)
本文编号：3029516
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PMPs流式细胞术检测结果横坐标表示异硫氰酸荧光素（FITC），纵坐标表示藻红蛋白（PE）
安徽医科大学硕士学位论文25图2不同来源的PMPs表达水平与正常对照组相比，UC及CD患者外周血中PMPs表达水平增加，具有统计学意义（P<0.05）。UC及CD组患者中PMPs增加程度无明显不同（P＞0.05）。5.1.3血浆中PMPs表达与IBD疾病活动之间的相关性分析在UC患者中，轻度、中度、重度PMPs表达水平分别为1832.94±1746.09/μL，2097.68±1581.15/μL及5291.17±3730.62/μL（图3）。如图，轻度与中度组间无差异（P＞0.05），轻度与重度、中度与重度组间存在差异（P＜0.05），差异具有统计学意义。在CD患者中，缓解期、轻度、中度及重度PMPs水平分别为1831.00±1009.17/μL，1858.56±1642.68/μL，2648.45±2365.78/μL及6164.44±2728.23/μL（图4）。如图，缓解期与重度、轻度与重度、中度与重度组间存在差异（P<0.05），其余组间无明显差异，差异具有统计学意义。
安徽医科大学硕士学位论文27伤变形，腺体融合或被大量炎性细胞浸润，尤其是UC组结肠隐窝脓肿处CD61表达明显增强。图5-APMPs在IBD肠粘膜中的表达（×40倍镜）图中蓝色为DAPI标记的DNA，红色为Cy5标记的CD61。正常对照（NC）组中，肠粘膜上皮组织大致正常，腺体结构完整，可见少量CD61表达。在CD组及UC组中，CD61表达明显增加，可见肠粘膜部分上皮损伤变形，腺体融合或被大量炎性细胞浸润，尤其是UC组结肠隐窝脓肿处CD61表达明显增强。5.2.2NETs在IBD肠粘膜中的表达与分布为观察肠粘膜局部是否有NETs形成，我们对各组的结肠组织进行预处理后，使用DAPI、MPO及H3多重免疫荧光染色，仅在某例重症UC患者的结肠标本局部见到如下图（图5-B）结构，中性粒细胞胞核扭曲解旋，颗粒蛋白MPO粘附在外放的染色质中，MPO和DNA便出现共定位，考虑系NETs形成。图5-BPMPs在IBD肠粘膜中的表达（×63倍油镜）图中蓝色为DAPI标记的DNA，绿色为FITC标记的髓过氧化物酶（MPO），红色为AlexaFluor555标记的组蛋白Histone3（H3）。中性粒细胞胞核扭曲解旋，颗粒蛋白MPO粘附在外放的染色质中，MPO和DNA便出现共定位，考虑系NETs形成。5.3PMPs诱导中性粒细胞释放NETs
【参考文献】：
期刊论文
[1]炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018年·北京）[J]. 吴开春,梁洁,冉志华,钱家鸣,杨红,陈旻湖,何瑶. 中国实用内科杂志. 2018(09)
[2]慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中血小板及内皮细胞微粒变化的探讨[J]. 但小苹,邱倩,杨再兴,焦燕,熊玮. 第三军医大学学报. 2013(24)
本文编号：3029516
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