人羊膜上皮细胞移植治疗肝硬化大鼠的初步研究

发布时间：2021-02-15 19:13

　　目的：观察羊膜上皮细胞在正常免疫大鼠体内存活、迁徙及对大鼠肝硬化的治疗作用,拟为人羊膜上皮细胞应用于肝硬化治疗提供实验理论。方法：参照文献提取羊膜上皮细胞并检测细胞总数、存活率及纯度,检测冰冻复苏前后细胞数及存活率。80只SD大鼠,完全随机设计分五组,移植4×106细胞约0.4ml悬浮液1周为A组,移植等量细胞悬浮液2周为B组,移植等量生理盐水为C组,肝硬化组为D组,空白对照组为E。参照预实验诱导肝硬化模型,通过脾实质移植首次将羊膜上皮细胞注入正常免疫大鼠模型内,通过检测A、B两组大鼠模型各脏器中人类特有Alu基因重复序列和白细胞抗原G是否存在及阳性脏器率的差异,观察细胞在体内的存活和各脏器中迁徙情况；形态学观察各组脏器；对B、C、D组肝脏行组织学HE染色,采用Chevallier肝纤维化组织学半定量计分系统分析大鼠肝硬化程度；采用免疫组化评分系统半定量检测B、C、D、E组肝脏中TGF-β1的表达；血清生化仪定量分析B、C、D、 E组血清中AST、ALT、ALB水平。结果：本实验提取羊膜上皮细胞数平均约为1.1×108/胎盘,存活率及纯度分别为84%和91%,冻存复苏后的细胞数和存活率... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
缩略词汇集表
1 绪论
    1.1 肝硬化的发病特点及病因
    1.2 肝硬化治疗现状
    1.3 干细胞在肝病的应用现状
    1.4 人羊膜上皮细胞
        1.4.1 人羊膜上皮细胞概述
        1.4.2 人羊膜上皮细胞肝细胞特性的研究进展
        1.4.3 人羊膜上皮细胞的研究不足
    1.5 课题拟解决问题
2 材料与方法
    2.1 实验材料与设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 生化试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法及步骤
        2.2.1 羊膜上皮细提取、冻存、鉴定及悬浮液制备
        2.2.2 实验分组及肝硬化模型制备
        2.2.3 细胞移植
        2.2.4 标本收集及移植效果检测方法
        2.2.5 统计分析
3 结果
    3.1 提取细胞检测
        3.1.1 细胞总数及存活率
        3.1.2 细胞纯度
        3.1.3 冻存后细胞数及存活率
    3.2 实验动物存活情况
    3.3 移植效果检测
        3.3.1 标本形态学与组织学观察
        3.3.2 DNA-PCR检测Alu基因
        3.3.3 免疫组化结果
        3.3.4 血清ALT\AST\ALB检测
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间主要的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]复合因素诱导大鼠肝硬化模型的建立[J]. 刘红梅,张玉玲,康金玲,王银.  宁夏医科大学学报. 2012(03)
[2]人羊膜上皮细胞具有向肝细胞样细胞分化的特性[J]. 罗宏武,黄湘俊,黄飞舟,刘浔阳.  中华肝脏病杂志. 2011 (08)
[3]Transplantation of microencapsulated umbilical-cord-blood-derived hepatic-like cells for treatment of hepatic failure[J]. Fang-Ting Zhang, Hui-Juan Wan, Ming-Hua Li, Jing Ye, Mei-Jun Yin, Chun-Qiao Huang, Jie Yu, Central Laboratory, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, China.  World Journal of Gastroenterology. 2011(07)
[4]人羊膜上皮细胞横向分化及脾内移植的初步研究[J]. 罗宏武,黄湘俊,黄飞舟,刘浔阳.  中国修复重建外科杂志. 2011(02)
[5]Stem cells for liver tissue repair:Current knowledge and perspectives[J]. Philippe A Lysy,David Campard,Fran oise Smets,Mustapha Najimi,Etienne M Sokal.  World Journal of Gastroenterology. 2008(06)



本文编号：3035396