体外RNA干扰下调PTEN表达对活化肝星状细胞微管及微丝结合蛋白cortactin和filamin A的影响

发布时间：2021-02-17 13:48

　　目的探讨RNA干扰下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）表达对体外培养的活化肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）微管及微丝结合蛋白皮层肌动蛋白结合蛋白（cortical actin-binding protein,cortactin）和细丝蛋白A（filamin A）的影响。方法通过反复感染293T细胞,扩增携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）]并表达绿色荧光（green fluorescent protein,GFP）的重组腺病毒（Ad-sh RNA/PTEN）及只表达GFP的对照空病毒（Ad-GFP）;体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,将腺病毒Ad-sh RNA/PTEN及空病毒Ad-GFP转染HSC-T6,应用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测HSC的PTEN m RNA及蛋白表达;采用免疫荧光法并利用激光扫描共聚焦显微镜技术检... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
引言
第1章 实验研究
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 重组腺病毒
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 主要试剂的配制
        1.1.5 主要实验仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 腺病毒的扩增及滴度的测定
        1.2.3 腺病毒转染体外活化HSC
        1.2.4 Westernblot实验技术检测HSC的PTEN蛋白表达
        1.2.5 实时荧光定量PCR技术检测HSC的PTENmRNA表达
        1.2.6 免疫荧光技术检测活化HSC的α-tubulin、γ-tubulin、coractin、filaminA表达
        1.2.7 统计学方法
    1.3 实验结果
        1.3.1 腺病毒扩增
        1.3.2 腺病毒滴度
        1.3.3 腺病毒转染HSC的转染效率
        1.3.4 靶向PTEN的shRNA下调体外活化HSC的PTEN表达
        1.3.5 PTEN表达下调对体外活化肝星状细胞α-tubulin表达的影响
        1.3.6 PTEN表达下调对体外活化肝星状细胞γ-tubulin表达的影响
        1.3.7 PTEN表达下调对体外活化肝星状细胞cortactin表达的影响
        1.3.8 PTEN表达下调对体外活化肝星状细胞filaminA表达的影响
    1.4 讨论
        1.4.1 活化HSC迁移与肝纤维化
        1.4.2 PTEN与活化HSC迁移
        1.4.3 细胞迁移与细胞骨架
        1.4.4 PTEN表达下调对体外活化HSC微管的影响
        1.4.5 PTEN表达下调对体外活化HSC微丝结合蛋白cortactin及filaminA的影响
    1.5 本章小结
    参考文献
第2章 综述 细胞骨架及细胞外基质在肝纤维化过程中的作用研究进展
    2.1 细胞骨架的组成及其功能
    2.2 细胞骨架与肝纤维化
    2.3 ECM的组成及其功能
    2.4 ECM在肝纤维化进程中的变化及作用
        2.4.1 ECM的主要成分改变及其在肝纤维化中的作用
        2.4.2 ECM的结构改变及其在肝纤维化中的作用
    2.5 结语
    参考文献
结论
致谢
导师简介
作者简介
学位论文数据集


【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化进程中细胞外基质对肝星状细胞的作用及机制研究进展[J]. 秦雨萌,陈胜华.  实用肝脏病杂志. 2017(03)
[2]胶原代谢在肝纤维化中的作用及中药调控胶原代谢研究进展[J]. 曲蕃升,程玉,彭金咏,许丽娜.  中国药师. 2017(04)
[3]体外RNA干扰下调PTEN表达对肝星状细胞系HSC-T6迁移的影响[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,陈静,王玉兰,张明婷,张朋垒.  中华肝脏病杂志. 2017 (03)
[4]腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响[J]. 郝礼森,宋小杰,章广玲,王静,刘博,张朋垒,张明婷,靳丽敏.  中国病理生理杂志. 2017(03)
[5]PTEN表达下调促进体外活化大鼠肝星状细胞黏附[J]. 郝礼森,张家琪,刘博,章广玲,靳丽敏,张明婷,张朋垒.  基础医学与临床. 2017(03)
[6]PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞黏着斑激酶信号转导的影响研究[J]. 魏月,郝礼森,任昌镇,章广玲,陈静,王静,莫艳波,张明婷.  中国全科医学. 2016(29)
[7]γ-tubulin、HER-2和k-ras在乳腺癌组织中的表达及临床意义[J]. 张建立,马金海,崔伟,杨永滨.  解放军医药杂志. 2016(07)
[8]细胞外基质、基质金属蛋白酶与恶性肿瘤关系的研究进展[J]. 胡梅艳,孙晓红.  肿瘤药学. 2016(01)
[9]川芎嗪对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭和细胞骨架的影响[J]. 毕蕾,颜晓静,杨烨,陈卫平.  中国药理学通报. 2016(02)
[10]细胞骨架与人滋养细胞迁移关系的研究进展[J]. 周丽娟,韩磊,李力.  解放军医学杂志. 2015(07)



本文编号：3038073