炎症因子上调SREBP-1致小鼠原代肝细胞脂质异常聚集及损伤

发布时间：2021-02-19 11:31

　　第一部分小鼠原代肝细胞的分离与培养目的：肝脏是脂质代谢的重要器官，建立小鼠原代肝细胞的体外培养技术，用于后续脂代谢研究。方法：采用IV型胶原酶原位二步灌流法分离小鼠原代肝细胞。用台盼蓝试剂对新鲜分离的细胞进行染色以检测细胞活率，并在不同时间点观察细胞贴壁情况和培养基中白蛋白的分泌情况。通过对肝细胞白蛋白进行免疫细胞化学染色和糖原染色，完成对肝细胞的鉴定。结果：台盼蓝结果显示:本法所制得的小鼠原代肝细胞活率最高可达90%。刚分离的肝细胞大多数呈单个球形，具有一定立体感。4小时后肝细胞已基本贴壁，可见肝细胞的典型的双核结构，胞质呈扁平状。1天后双核更加明显，核仁清晰可见，胞质贴壁更加扁平，2天后细胞成多边形，并维持此形态数天。免疫细胞化学染色和糖原染色显示，所培养细胞基本均可合成白蛋白和糖原，并且一周以内都可以在培养基中检测到细胞分泌的白蛋白。结论：小鼠原代肝细胞的分离与培养技术建立成功，在一周内具有较好的形态和功能，可进行后续实验。第二部分炎症因子对小鼠原代肝细胞脂质积聚及损伤的影响目的：近年来的研究发现，慢性系统性炎症在代谢性疾病的发生和发展中有十分重要的作用。我们通过建立原代肝细胞分... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

通过台盼蓝染色染色观察细胞活率

g. 5 d h. 6 d i. 7 d图 1.2 在不同的时间点观察肝细胞的贴壁情况Figure 1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time points. ×2002.3 小鼠原代肝细胞的鉴定结果2.3.1 小鼠原代肝细胞免疫细胞化学结果白蛋白由肝实质细胞合成。对白蛋白进行免疫细胞化学染色后发现，所培养的细胞胞浆中均含有有大量棕黄色颗粒（见图 1.3.1 a），并且空白对照无黄染颗粒（见图 1.3.1 b），说明本法培养所得细胞基本均为肝实质细胞,小鼠原代肝细胞分离与培养技术建立成功。

g. 5 d h. 6 d i. 7 d图 1.2 在不同的时间点观察肝细胞的贴壁情况1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time po鼠原代肝细胞的鉴定结果鼠原代肝细胞免疫细胞化学结果蛋白由肝实质细胞合成。对白蛋白进行免疫细胞化学染色后发现，胞浆中均含有有大量棕黄色颗粒（见图 1.3.1 a），并且空白对照无图 1.3.1 b），说明本法培养所得细胞基本均为肝实质细胞,小鼠原代培养技术建立成功。

【参考文献】：
期刊论文
[1]非酒精性脂肪肝发病机制——“二次打击”学说研究进展[J]. 董姝,刘平,孙明瑜.  临床肝胆病杂志. 2012(07)
[2]Role of cytokines and chemokines in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Vincent Braunersreuther,Giorgio Luciano Viviani,Franois Mach,Fabrizio Montecucco.  World Journal of Gastroenterology. 2012(08)



本文编号：3041058