miR-24-3p靶向抑制STING-IRF3缓解小鼠肝缺血再灌注损伤的机制研究

发布时间：2021-02-26 02:42

　　目的:1.分析小鼠肝脏缺血再灌注（Ischemia and reperfusion,I/R）动物模型中,肝脏组织内mi R-24-3p和STING表达水平的相关性;2.观察差异表达的mi R-24-3p对I/R体内模型中STING和IRF3相关蛋白表达、炎性因子分泌、肝脏组织病理学改变和肝功能损伤程度的影响;3.探讨mi R-24-3p参与STING-IRF3信号通路的调控作用以及影响肝脏缺血再灌注损伤（Ischemia and reperfusion injury,IRI）的分子机制。方法:分别采用C57BL/6J小鼠和RAW264.7细胞（枯否细胞（Kupffer cells,KCs）替代细胞株）建立肝I/R体内外模型。肝脏组织HE染色评估肝损伤,微板法检测造模后血清AST和ALT的水平,ELISA检测血清炎症因子TNF-α、IL-6的水平,TUNEL染色评估肝脏组织细胞凋亡情况,Target Scan数据库预测分析STING与mi R-24-3p的潜在结合位点,并采用荧光素酶报告基因实验验证STING是否为mi R-24-3p的靶基因,q RT-PCR检测肝组织mi R-24-3... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

小鼠肝脏组织损伤情况

重庆医科大学博士研究生学位论文25图1-2.小鼠血清中AST和ALT的表达Figure1-2.serumlevelofASTandALTinmiceA:I1R9小鼠血清中AST、ALT的表达水平B:不同再灌注时间小鼠血清AST表达水平C:不同再灌注时间小鼠血清ALT表达水平A:serumlevelofASTandALTinI1R9mice.B:serumlevelofASTinmicewithdifferentreperfusiontime.C:serumlevelofALTinmicewithdifferentreperfusiontime.n=6;**p<0.01,***p<0.001vs.sham2.3不同再灌注时间对小鼠肝组织中miR-24-3p与STING转录水平表达的影响及其两者表达的相关性分析为验证不同再灌注时间对小鼠肝脏组织miR-24-3p与STING表达的影响，并进一步分析两者表达的相关性，我们用qRT-PCR检测不同再灌注时间小鼠肝脏组织中miR-24-3p与STING的表达。结果提示，与sham组相比，随着再灌注的时间延长，miR-24-3p的表达逐渐降低，在I1R9达到相对低谷（P<0.01），差异具有显著统计学意义(图1-3A)，而STING的表达逐渐增加，在I1R9达到相对高峰（P<0.001）差异具有显著统计学意义（图1-3B）。另通过Pearson相关性分析，得出结果，小鼠肝脏组织中miR-24-3p与STING的表达呈负相关，差异具有显著统计学意义（P<0.0001,r=-0.8734）(图1-3C)。

重庆医科大学博士研究生学位论文26图1-3.小鼠肝脏组织中miR-24-3p的表达及与STING表达的相关性Figure1-3.ExpressionofmiR-24-3panditscorrelationwithexpressionofSTINGinlivertissueofmice.A:小鼠肝组织中miR-24-3p的表达水平B:小鼠肝组织中STING的表达水平C:小鼠肝组织中miR-24-3p与STING表达ROC分析A:ExpressionofmiR-24-3pinlivertissueofmice.B:ExpressionofSTINGinlivertissueofmice.C:ROCanalyzeofmiR-24-3pandSTINGinlivertissueofmice.n=6;ns,p>0.05,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001vs.sham3讨论肝脏IRI是引起移植物肝损伤、免疫排斥反应甚至是术后移植物失功的主要原因之一[1]。其中肝IRI引起的肝实质细胞凋亡和逐级放大的炎症级联反应可诱发肝功能损伤和增加移植物急慢性排斥反应的发生风险[2]。因此减少肝I/R介导的炎症反应，防止肝细胞凋亡成为治疗肝IRI的重中之重。MicroRNA是由20-24个核苷酸构成的一类内源性非编码RNA，此类RNA并不直接参与基因编码而是通过结合性抑制作用（分子海绵），沉默，降解等方式

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-148a通过抑制Ca2+/钙调蛋白依赖激酶Ⅱα（CaMKⅡα）减少小鼠肝缺血再灌注损伤[J]. 郑道峰,何雕,卢修贤,孙超,罗清波,吴忠均.  细胞与分子免疫学杂志. 2016(09)
[2]Predictive factors of short term outcome after liver transplantation: A review[J]. Giuliano Bolondi,Federico Mocchegiani,Roberto Montalti,Daniele Nicolini,Marco Vivarelli,Lesley De Pietri.  World Journal of Gastroenterology. 2016(26)
[3]Post reperfusion syndrome during liver transplantation:From pathophysiology to therapy and preventive strategies[J]. Antonio Siniscalchi,Lorenzo Gamberini,Cristiana Laici,Tommaso Bardi,Giorgio Ercolani,Laura Lorenzini,Stefano Faenza.  World Journal of Gastroenterology. 2016(04)
[4]UⅡ/UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响[J]. 涂文娟,汪小庭,刘亮明,朱彤,梁冬雨,杨志文,高得勇.  中国免疫学杂志. 2014(10)
[5]Molecular mechanisms of liver ischemia reperfusion injury:Insights from transgenic knockout models[J]. Gourab Datta,Barry J Fuller,Brian R Davidson.  World Journal of Gastroenterology. 2013(11)
[6]新生小鼠缺血缺氧性脑损伤中TLR4-TRIF信号通路的表达[J]. 黄晓雷,崔桂云.  中国实用神经疾病杂志. 2012(09)
[7]Nuclear factor-KB decoy oligodeoxynucleotides attenuates ischemia/reperfusion injury in rat liver graft[J]. Ming-Qing Xu, Mao-Lin Yan, Ming-Man Zhang, Lu-Nan Yan, Department of General Surgery, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China Xiu-Rong Shuai, Department of General Surgery, Sichuan Provincial Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Leshan 640014, Sichuan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(44)
[8]Toll-like receptor 4 involvement in hepatic ischemia/reperfusion injury in mice[J]. Ori Rotstein.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2004(02)



本文编号：3051948