HCV在树鼩原代肝细胞中感染与转染受体辅助感染的研究

发布时间：2021-03-15 11:26

　　丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎病的主要病原体。据1999年世界卫生组对于HCV感染情况的调查,全球感染HCV的患者约1.7-2.0亿,我国属于HCV的高度感染区,其感染者约占3.2%。高效病毒体外培养体系与合适实验动物模型的缺乏,是丙型肝炎药物与疫苗研究的主要障碍。2005年,高效的HCV病毒细胞培养体系的建立,可以经过体外培养获得高感染性的HCV病毒,使得动物模型的建立尤为紧迫。除丙型肝炎病毒的自然宿主——人和黑猩猩外,尚未发现其他自然动物对HCV易感。树鼩是一种主要分布于我国云南地区低等灵长类动物。研究发现,树鼩可被HCV患者的血清感染,但是由于HCV患者血清的来源不明、病毒滴度较低、感染不稳定、树鼩个体背景复杂等原因,丙型肝炎病毒对树鼩的感染特性未被最终阐明。本研究以人工驯化、繁育的树鼩为实验对象,采用二步灌流、胶原酶消化法,分离、获得树鼩原代肝细胞（PTH）,优化灌流液、离心速度和培养基,用单因素比较和正交实验法进行比较各优化因素之间的差别,最终以台盼蓝染色法测定获得PTH细胞数量,用MTT法测定PTH的状态。实验确定的最佳灌流液为D-Hank’s、最佳离心速度为800rpm... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
目录
插图与附表清单
英文缩写词表
第一章 绪论
    1.1 丙型肝炎与丙型肝炎病毒
        1.1.1 HCV生物学特性与致病机制
        1.1.2 丙型肝炎的诊断和治疗
    1.2 丙型肝炎动物模型
        1.2.1 黑猩猩
        1.2.2 小鼠
        1.2.3 树鼩作为HCV的小动物模型的研究进展
    1.3 丙型肝炎体外培养技术
        1.3.1 HCV亚基因组复制子培养体系
        1.3.2 HCV细胞培养体系
        1.3.3 细胞系
        1.3.4 原代细胞
    1.4 丙型肝炎入胞机制与受体
        1.4.1 四个受体及功能机制
        1.4.2 CD81转染增强感染作用及病毒适应性变异
    1.5 实验技术路线图
第二章 树鼩原代肝细胞的分离培养方法的优化
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验试剂
        2.2.4 实验方法的条件优化
    2.3 实验结果
        2.3.1 优化灌流液和离心速度前后树鼩原代肝细胞状态比较
        2.3.2 优化方法前后树鼩原代肝细胞得量、成活率比较
        2.3.3 优化方法后树鼩原代肝细胞生长曲线
        2.3.4 优化方法前后树鼩原代肝细胞存活时间比较
    2.4 讨论
        2.4.1 优化方法对树鼩原代肝细胞的分离获得影响
        2.4.2 优化方法前后树鼩原代肝细胞生长情况的差异
        2.4.3 分析优化方法后树鼩原代肝细胞生长曲线与形态观察
    2.5 本章小结
第三章 人CD81受体转染树鼩原代肝细胞
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验试剂（试剂盒）
        3.2.4 实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 CD81转染后细胞状态,判断转染试剂对细胞的影响
        3.3.2 CD81转染树鼩原代肝细胞PCR检测结果
        3.3.3 CD81转染树鼩原代肝细胞定量PCR检测结果
    3.4 讨论
        3.4.1 CD81转染树鼩原代肝细胞定性检测结果分析
        3.4.2 CD81转染树鼩原代肝细胞相对定量结果分析
    3.5 本章小结
第四章 受体介导HCV感染树鼩原代肝细胞的感染性的变化与分析
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂（试剂盒）
        4.2.4 PCR引物
        4.2.5 实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 转染表达了CD81受体的PTH感染HCV后的上清定量PCR结果
        .4.3.2 比较感染过程中转染的PTH和未转染的上清载量差异。
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第五章 结论
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文目录附录
附录B 其他需要说明的内容


【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光定量PCR法检测血清中HCV-RNA[J]. 鲁军.  中国医药导报. 2008(34)
[2]丙型肝炎病毒（HCV）培养模型的研究进展[J]. 刘艳,张贺秋,凌世淦,祁自柏.  细胞与分子免疫学杂志. 2005(S1)
[3]丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义[J]. 谢立,吴晓东.  世界华人消化杂志. 2005(07)
[4]丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立[J]. 姚相杰,郭佳,郑从义,方呈祥,屈三甫,陈震球,李中红,李信墙,李卫云.  科学通报. 2004(10)
[5]树鼩对丙型肝炎病毒的易感性研究[J]. 谢志春,高伟志,苏洁寒,邬质彬,徐国城,Jose Ignacio,Riezu Boj,Jesus Prieto.  广西医科大学学报. 2000(03)
[6]丙型肝炎病毒检测新近进展[J]. 陈斌冠.  广西预防医学. 1998(04)
[7]成年树实验感染丙型肝炎病毒的初步研究[J]. 王海平,周永兴,姚志强,洪沙,李光玉.  第四军医大学学报. 1997(04)



本文编号：3084096