Pim-3基因对暴发性肝衰竭的肝保护效应研究

发布时间：2021-03-30 23:23

　　暴发性肝衰竭（FHF）是一死亡率极高,以大量肝细胞凋亡、严重肝损害为特征的临床疾病。丝/苏氨酸激酶Pim-3基因具有显著的肝细胞凋亡抑制和生长促进效应,预期能在FHF的疾病治疗中发挥积极作用。为此,本课题进行了Pim-3基因转染动物活体肝组织的实验,目的是探讨Pim-3基因对FHF的组织修复或肝保护效应及其作用机制。课题研究采取了多步骤分阶段的方式进行。首先,采用RT-PCR的方法,从大鼠心肌组织中分离并克隆了Pim-3基因。通过基因重组技术,完成了Pim-3基因质粒载体的构建,并利用基因转染技术顺利地实现了重组体质粒pEGFP-N2/Pim-3在体外真核细胞的表达和活性测定;其次,采用常规和流体力学方法进行GFP表达质粒溶液的鼠尾静脉注射,证明常规注射和流体力学注射是两种不同的活体基因转染方法,具有不同的器官靶向性和基因转染效率。其中流体力学方法是一个高效的肝靶向性动物活体基因转染方法;再次,采用腹腔注射LPS/D-GalN的方法建立FHF大鼠模型。找到了制备动物模型最佳的药物剂量,证明小剂量LPS可诱导D-GalN致敏大鼠产生显著但非致死性的急性肝衰竭。其中,肝细胞凋亡是LPS/D... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：183 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

质粒pEGFP一2图谱(其中标明限制性位点和多克隆位点)

“RNA逆转录成cDNA后，’口入”酶切位“的克隆弓’物进‘了PCR扩增。扩尹产物经琼脂糖凝胶电泳后，得到一条预期的998bp目的基因全长编码cDNA，尤明显杂带(图2.4)。图2.4人鼠Pim一基因全长编码cONA扩增电泳图M:基因cDNA片段 DL2000DNAMarker;1道:目的2.3.3转化菌平板筛选结果

样品的OD260nm/OD280nm值为 1.89，表明总RNA纯度较高，没有蛋白质的残余，质量可靠。总RNA非变性琼脂糖凝胶电泳结果(图2.3)显示:185(相当于1.gkb)、285(相当于4.skb)二条带较为清晰，而5s较淡，提示总RNA提取较为完整、无明显降解。


本文编号：3110331