干细胞分化及其对急性肝衰竭大鼠治疗的实验研究

发布时间：2021-04-10 12:05

　　肝功能衰竭严重威胁人类健康。原位肝移植是目前最好的治疗手段,但治疗费用高且受肝源限制,迄今仍难以作为终末期肝病患者的常用治疗方法。作为肝移植的替代治疗,有研究证实肝细胞移植有助于肝损伤的恢复。但由于肝细胞同样来源受限,而且分离的肝细胞寿命很短,冻存后活性差等原因,严重阻碍了其临床应用。肝脏卵圆细胞是成体肝脏干细胞,在严重肝损伤或肝细胞再生受到抑制时,则卵圆细胞增殖进而分化,来完成肝组织的再生。探讨卵圆细胞的增殖与分化特性,了解调控卵圆细胞生长和分化的细胞因子及其之间的相互关系,对肝损伤的修复具有重要意义。现已证实成体骨髓干细胞可以分化为肝实质细胞。目前骨髓干细胞的提取及其体外培养体系不一致, 诱导方法、诱导因子以及诱导时间等问题的研究还不充分。因此,很有必要对骨髓干细胞体外诱导分化进行探讨。有关骨髓干细胞移植治疗肝功能衰竭的研究已取得可喜的成果。细胞移植后是否可分化为肝细胞以及移植后受体的肝功能恢复问题,目前仍有争议。另外关于移植细胞如何进入肝实质?移植途径与移植细胞的转归是否有关?移植细胞在受体体内的分布等问题仍然不清楚。为此,本研究分以下几部分进行:1、以大鼠肝干细胞系WB F-3... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

不同诱导分化时间WBF-344细胞AFP、ALBmRNA表达GAPDH

第三军医大学博士学位论文为探讨 WB F-344 细胞在体外向肝细胞的定向诱导分化，我们用含 10％FCS的 DMEM，并加入 HGF、EGF、胰岛素及地塞米松组成特异分化体系，对 WBF-344 细胞进行体外诱导分化，于不同时间点光镜下观察发现，一周后细胞出现形态变化，主要表现为集聚、延伸并形成小梁样结构；之后细胞生长速度减慢，细胞逐渐由六边形转变为梭形；3 周后细胞生长缓慢，逐渐死亡（图 5A）。诱导 0 天 诱导 1 周 诱导 2 周

3、骨髓间充质干细胞 ALB、AFP mRNA 的表达在培养的不同时间点，通过半定量 RT-PCR 法检测骨髓间充质干细胞 ALB、AFPmRNA 的表达，发现新鲜分离的骨髓干细胞表达少量的 AFPmRNA,而不表达 ALmRNA。在诱导组，培养 1 周时，出现少量的 ALB mRNA，随着分化时间的延长，ALB mRNA 的表达逐渐增加，3 周时达高峰，以后开始下降。诱导２周和 3 周后分别撤去 HGF 组，４周时，前者未检测到 ALB mRNA 而后检测到 ALB mRNA。AFPmRNA的表达量在 2 周时最大，以后逐渐减少。在非诱导组，各时间段 ALB mRNA 均（－），而 AFP mRNA 在 0 天时表达量最大，以后逐渐减少，3 周时几乎检测不到。在紫外灯下测定凝胶电泳结果的灰度值，以 GAPDH 的灰度值为 1，求得各组的相对灰度值，以诱导时间为横坐标，相对灰度值为纵坐标作图，结果如图 4，可以看出诱导组于 3 周时表达 ALB mRNA 最多，而于 2 周时 AFP mRNA 表达量最多。M 0d 1w 2w 3w 4w 2w- 3w- + M 0d 1w 2w 3w 4w +A

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠骨髓干细胞诱导分化为肝细胞的实验研究[J]. 周一鸣,胡大荣,姚鹏,范公忍.  中华肝脏病杂志. 2004(12)



本文编号：3129607