乙型肝炎病毒X蛋白与人RECQL解旋酶的相互作用研究

发布时间：2021-04-17 13:11

　　全世界大约20亿人曾经感染过或者现在感染了乙型肝炎病毒,超过了3亿五千万人是乙肝病毒携带者。该病毒虽然是最常见的人类病原之一,但是它却引起了非常严重的公众健康问题。然而由HBV感染所导致的肝癌的发生机理目前尚不完全清楚。研究表明,病毒与宿主因子之间的相互作用可激活致瘤信号通路并引起一系列的细胞转化,如细胞染色体不稳定性的提高、端粒磨损、基因突变等。而且,研究发现,HBV基因组所编码的HBx在诱导宿主基因组不稳定性方面发挥着重要功能。RecQ DNA家族解螺旋酶在进化中是高度保守的,在维持细胞基因组的完整性方面具重要功能。微生物如大肠杆菌、酿酒酵母仅仅只有一种RecQ解螺旋酶,但高等真核生物却含有几种RecQ解旋酶,如在人细胞中,目前发现了五种RecQ解螺旋酶,即RECQL、BLM, WRN、RTS和RecQ4。RecQ解螺旋酶定位在细胞核里,在DNA复制、重组和修复中发挥重要作用。为了进一步揭示HBx的生物学功能及其在肝癌诱导发生中的作用,本研究通过酵母双杂交方法筛选到了一个可以与HBx发生相互作用的人解螺旋酶蛋白（DNA helicase Q1-like, RECQL）。为了进一步验... 

【文章来源】：湖北大学湖北省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
一、绪论
    1 乙型肝炎病毒X蛋白
        1.1 HBx的生物学功能
            1.1.1 HBx的反式激活作用和信号转导功能
            1.1.2 HBx在肝癌中的诱导与转化
            1.1.3 HBx在细胞凋亡中的调控机制
                1.1.3.1 HBx抑制肝细胞凋亡
                1.1.3.2 HBx促进细胞凋亡
    2 染色体稳定性下降可导致肿瘤发生
    3 RECQL解螺旋酶
        3.1 RECQ的结构与生物学特性
            3.1.1 RECQL在DNA复制,重组,修复中的作用
            3.1.2 RECQL在抑制癌症和肿瘤方面的作用
    4 研究的目的与意义
二、材料与方法
    1 材料
        1.1 细胞系、质粒、菌株和引物
            1.1.1 细胞系
            1.1.2 质粒
            1.1.3 菌株
            1.1.4 引物
        1.2 培养基
        1.3 试剂和酶
        1.4 主要缓冲液
    2 方法
        2.1 PCR
        2.2 质粒DNA的抽提
        2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备
        2.4 大肠杆菌的常规转化
        2.5 大肠杆菌的快速转化
        2.6 SDS-PAGE
        2.7 免疫印记
        2.8 哺乳动物细胞HEK293的复苏
        2.9 哺乳动物细胞HEK293的冻存
        2.10 哺乳动物细胞HEK293的组织培养
        2.11 哺乳动物细胞的转染（以sofast转染试剂为列）
        2.12 免疫共沉淀
三、结果与分析
    1 HBx相互作用蛋白的筛选
    2 表达载体的构建
    3 免疫共沉淀验证HBx与RECQL之间的相互作用
    4 HBx与RECQL共定位在细胞中
    5 HBx与RECQL缺失突变体的构建
四、讨论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎病毒X基因对正常肝细胞HL7702凋亡影响的初步探讨[J]. 石红丽,范宝峰,尤红娟,刘晓梅,史震,汤仁仙.  徐州医学院学报. 2008(04)
[2]染色体不稳定分子机制及其与肿瘤发生研究的新进展[J]. 晏光荣.  癌症. 2004(03)
[3]p73β inhibits transcriptional activities of enhancer I and X promoter in hepatitis B virus more efficiently than p73α[J]. Tsai-Ping Li.  World Journal of Gastroenterology. 2002(06)



本文编号：3143513