天然产物D182对小鼠肠炎的治疗作用及其分子机制
发布时间：2021-04-17 20:23
Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）是参与天然免疫的一类重要蛋白质分子,也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。在人类中已经鉴定了10种TLRs,在小鼠中有13种,其广泛分布于多种细胞表面,但主要表达于和宿主防御功能有关的细胞,如单核巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞、淋巴细胞、内皮细胞和上皮细胞等。在特定条件下,TLRs异常表达并过度激活,导致机体功能紊乱,引发各种疾病,例如炎症性肠病（IBD）、系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（AR）等。因此,寻找新的能够调控TLRs信号通路的阻断物,可有望为治疗TLRs信号过度活化相关的免疫疾病带来新希望。D182是一种海洋来源的共生菌产物,我们前期研究发现其对LPS诱发的小鼠脓毒症模型具有治疗作用,本文以D182为研究对象,对其治疗DSS诱导的小鼠肠炎及其分子机制行了研究。1、小分子化合物D182能改善DSS诱导的小鼠急性肠炎的相关症状炎症性肠病（IBD）是由多种因素引起的局部炎症,且相关TLRs信号通路在其发病过程中其关键作用。为了探究D182的体内抗炎效果,我们构建了DSS诱导的小鼠急性肠炎模型,分析了D1...
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
D182对于巨唆细胞向结肠部位浸润的影响
图3-2 D182对小鼠巨哩细胞细胞活力的影响Fig3-2 Effect of D182 on mouse macrophages cell viability, mouse macrophages cellswere treated with various concentrations of D182 for 24 or 48 h. Cell viability wasdetermined by CCK-8 assay. **p<0.01, ***p<0.001 compared to control.3.4.3 D182在基因和蛋白水平上抑制TLR2/6和TLR4配体诱导的RA\V264.7细胞系炎性因子的产生首先我们蹄选了儿种TLRs配体刺激小鼠巨Pi细胞的能力（图3-3)，通过实验我们选取PamCSK4 lOOng/mK LPS lOOng/ml和PGN lOug/ml作为后续实验用的浓度。我们采用Q-PCR的方法，检测RAW264.7细胞TNF-a mRNA的表达水平，jfj Elisa的方法检测培养RAW264.7细胞TNF-a分泌能力，如图3-4，D182对儿
巨唾细胞进行了验证，我们首先对获取的细胞进行了鉴定，从形态上观察到细胞大部分呈圆形，贴壁生长（图3-7A)。F4/80是小鼠原代腹腔巨唾细胞的表面标志，我们用流式细胞术检测所获取细胞表面F4/80的表达，从而鉴定它们是否为巨喷细胞。如图3-7B所示F4/80阳性的细胞约占总细胞的75.49%,说明我们获取的细胞可以满足我们的实验要求。Q-PCR和Elisa法检测的D182对小鼠原代巨唾细胞TNF-ot基因表达的影响，如图3-8所示，D182对多种配体刺激小鼠原代巨嗟细胞TNF-a基因表达具有抑制效果且呈浓度依赖性。除此之外我们用Q-PCR方法检测了 D182对多种TLRs配体刺激引起的小鼠原代腹腔巨暖细胞IL-6产生的影响，如图3-9所示，D182对多种TLRs配体刺激引起的小鼠原代腹腔巨喷细胞IL-6的产生有抑制作用且呈浓度依赖性。验证了我们上述的结果，证明D182确实能抑制多种TLRs配体诱导小鼠巨唾细胞相关炎性因子的产生。A BaDsts 53* Csu 53' Cata OO!‘I:響 C3t5 . . Data.XJ Dsu.OOS, ::?6：.； - " :. a- ' . c■■ “ 1...■ ■.-.丨.I....丨....I..,..厂.■ I,, 1,,.,, 0 2>： 40： OX ！0:
【参考文献】：
期刊论文
[1]Innate immunity in inflammatory bowel disease[J]. Jesus K Yamamoto-Furusho,Daniel K Podolsky. World Journal of Gastroenterology. 2007(42)
[2]Role of Toll-like receptors in health and diseases of gastrointestinal tract[J]. Greg Harris,Rhonda KuoLee. World Journal of Gastroenterology. 2006(14)
本文编号：3144084
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
D182对于巨唆细胞向结肠部位浸润的影响
图3-2 D182对小鼠巨哩细胞细胞活力的影响Fig3-2 Effect of D182 on mouse macrophages cell viability, mouse macrophages cellswere treated with various concentrations of D182 for 24 or 48 h. Cell viability wasdetermined by CCK-8 assay. **p<0.01, ***p<0.001 compared to control.3.4.3 D182在基因和蛋白水平上抑制TLR2/6和TLR4配体诱导的RA\V264.7细胞系炎性因子的产生首先我们蹄选了儿种TLRs配体刺激小鼠巨Pi细胞的能力（图3-3)，通过实验我们选取PamCSK4 lOOng/mK LPS lOOng/ml和PGN lOug/ml作为后续实验用的浓度。我们采用Q-PCR的方法，检测RAW264.7细胞TNF-a mRNA的表达水平，jfj Elisa的方法检测培养RAW264.7细胞TNF-a分泌能力，如图3-4，D182对儿
巨唾细胞进行了验证，我们首先对获取的细胞进行了鉴定，从形态上观察到细胞大部分呈圆形，贴壁生长（图3-7A)。F4/80是小鼠原代腹腔巨唾细胞的表面标志，我们用流式细胞术检测所获取细胞表面F4/80的表达，从而鉴定它们是否为巨喷细胞。如图3-7B所示F4/80阳性的细胞约占总细胞的75.49%,说明我们获取的细胞可以满足我们的实验要求。Q-PCR和Elisa法检测的D182对小鼠原代巨唾细胞TNF-ot基因表达的影响，如图3-8所示，D182对多种配体刺激小鼠原代巨嗟细胞TNF-a基因表达具有抑制效果且呈浓度依赖性。除此之外我们用Q-PCR方法检测了 D182对多种TLRs配体刺激引起的小鼠原代腹腔巨暖细胞IL-6产生的影响，如图3-9所示，D182对多种TLRs配体刺激引起的小鼠原代腹腔巨喷细胞IL-6的产生有抑制作用且呈浓度依赖性。验证了我们上述的结果，证明D182确实能抑制多种TLRs配体诱导小鼠巨唾细胞相关炎性因子的产生。A BaDsts 53* Csu 53' Cata OO!‘I:響 C3t5 . . Data.XJ Dsu.OOS, ::?6：.； - " :. a- ' . c■■ “ 1...■ ■.-.丨.I....丨....I..,..厂.■ I,, 1,,.,, 0 2>： 40： OX ！0:
【参考文献】：
期刊论文
[1]Innate immunity in inflammatory bowel disease[J]. Jesus K Yamamoto-Furusho,Daniel K Podolsky. World Journal of Gastroenterology. 2007(42)
[2]Role of Toll-like receptors in health and diseases of gastrointestinal tract[J]. Greg Harris,Rhonda KuoLee. World Journal of Gastroenterology. 2006(14)
本文编号：3144084
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3144084.html
最近更新
教材专著
