运用蛋白质组学的方法研究乙肝表面抗原持续表达对宿主细胞的影响

发布时间：2021-04-18 03:36

　　本博士论文的主要贡献是：首先采用基于二维凝胶电泳的定量蛋白质组技术分析了乙肝表面抗原持续表达细胞系及其对照细胞系的差异蛋白质组,共鉴定出81个差异表达的蛋白质。通过对差异蛋白质的功能分析,发现HBsAg的持续表达干扰宿主的物质和能量代谢。一组促细胞凋亡的候选蛋白质表达上调,而抗细胞凋亡的候选蛋白质表达下调,并着重研究GRP78在HBsAg在其中的作用,揭示了乙肝病毒促宿主细胞凋亡的一种机制；随后采用血清蛋白质组分析（SERPA）和质谱联用的技术,首次高通量分析HBV慢性感染转基因鼠模型中自身抗体的产生情况,并鉴定其特异性抗原,得到HBV慢性感染自身抗体谱,为HBV慢性感染引起的慢性肝脏疾病的早期防治提供科学依据；分泌蛋白质被认为对疾病的早期检测和诊断具有极其重要的意义,而糖基化修饰在分泌蛋白质中占有相当大的比例且蛋白质糖基化在很多重要的生理和疾病过程中起重要作用。基于此,本论文利用亲水法富集糖肽结合体内标记定量蛋白质组技术,首次大规模地鉴定了乙肝表面抗原持续表达细胞上清相对于对照细胞系中分泌蛋白质及其N-型糖修饰的差异谱；最后发展了一种基于磁性材料快速质膜富集的方法,适用于细胞质膜蛋白... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

乙型肝炎病毒感染的世界分布

3.1.1HBsAg的表达情况检测平行培养H氏Ag持续表达细胞系s及其对照细胞系Neo。在细胞使用前，收集培养一L清，ELIsA试剂盒检测HBsAg的表达，见图2一2。可见HBsAg持续表达细胞系s中HBsAg的含量很高，而对照细胞系Neo细胞上清中未检出HBsAg。HBsAg持续表达细胞系的成功构建，模拟部分临床乙肝携带者的特征，为研究HBsAg持续表达对宿主细胞的影响提供了极佳的模型。︵0价叶00︶哎山伪访HNeoS图2一25和Neo细胞上清中HBsAg的含量，S和Neo分别为HBsAg持续表达细胞系HepGZ一s一GZ及对照细胞系HepGZ一Neo一F4的缩写。 3.L2HBsAg持续表达细胞系增殖与抗凋亡能力检测凋亡一直是人们所关注的问题，在临床上慢性乙肝患者也表现出不同程度的肝损伤。我们对HBsAg持续表达细胞株进行了增殖和凋亡相关的检测。staurosporine是一种可以通透细胞膜的蛋白激酶C(PKC)抑制剂〔4】。喜树碱(Cal即tothecin)是一种拓扑异构酶抑制剂，其作用机制是使细胞DNA单链/双链断裂，从而干扰其基因转录引发凋亡。二者在生物学实验中常作为凋亡诱导剂。用上述两种凋亡诱导剂处理细胞，用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比，用细胞计数试剂盒CCK一8检测凋亡发生后细胞的存活能力

和另外一种凋亡诱导剂Camptothecin处理细胞，具体流程如本章方法部分2.14所述，不经处理的两株细胞系{1为对照。实验所用溶剂 DM50也被没置为对照以消除其对实验结果的影响，流式细胞仪分析凋亡细胞比例，如图2一3C)所示，无论是staurospo，，i，飞e还是Ca，1、ptotlleein处理后HBsAg持续表达细胞系的凋亡发生比例都明显高于对照，差异具有显著性。从HBsAg持续表达细胞系的特征分析提示我们，HBsAg的持续表达可以导致宿主细胞的增殖能力下降和易于凋一亡。但是通过何种途径介导至今仍不清楚，山于HBV感染和细胞组成成分的复杂性

【参考文献】：
期刊论文
[1]Prevalence of occult hepatitis B virus infection in haemodialysis patients from central Greece[J]. Paraskevi Mina,Sarah P Georgiadou,Christos Rizos,George N Dalekos,Eirini I Rigopoulou.  World Journal of Gastroenterology. 2010(02)



本文编号：3144721