参附注射液对消化系统炎症性疾病的保护作用及分子机制研究

发布时间：2021-05-18 00:22

　　第一部分参附注射液通过抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12细胞损伤目的:非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis,NASH）包括脂肪变性、肝炎、肝细胞损伤和纤维化。在本研究中,我们拟探讨一种传统中药-参附注射液（Shen Fu preparation,SF）在体外肝脂肪变性模型中的保护作用和潜在机制。方法:建立棕榈酸（Palmitic acid,PA）诱导鼠肝细胞损伤模拟离体NASH模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法（Terminal dexynucleotidyl transferase（Td T）-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL）和甘油三酯比色测定法（TG Colorimetric Assay）对细胞凋亡和细胞内甘油三酯水平（Intracellular triglyceride,i TG）进行评估;分别采用DCF（Dichlorofluorescein,二氯荧光素）和JC-1（5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-... 

【文章来源】：山东中医药大学山东省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
Abstract
第一部分 参附注射液通过抑制JNK/NOX4和JNK/NFΚB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12 细胞损伤
    引言
    材料和方法
        一、实验试剂与器材
            (一)实验试剂
            (二)实验器材
        二、细胞培养和处理
        三、TUNEL assay(原位末端标记法)：检测细胞凋亡
        四、甘油三酯比色法(Triglyceride Colorimetric Assay)：测定iTG水平
        五、酶联免疫吸附测定(ELISA)：检测细胞因子水平
        六、免疫印迹(Immunoblot assay)：测定JNK、NFκB和 Nox4 的表达水平
        七、JC-1 assay:线粒体膜电位(MMP)检测
        八、DCF assay:活性氧(ROS)水平检测
        九、FFA uptake assay(Free fatty acid,FFA,游离脂肪酸)
        十、统计学分析
    结果
        一、参附注射液(SF)能改善棕榈酸诱导的AML12 细胞损伤
        二、参附注射液可以减少棕榈酸(PA)处理的AML12 细胞炎性细胞因子的产生..
        三、参附注射液可以减轻PA诱导的AML12 细胞线粒体功能障碍
        四、参附注射液通过抑制JNK-Nox4 通路可以减轻PA诱导的AML12 细胞凋亡
        五、参附注射液通过抑制JNK/NFκB通路可以减少PA诱导的细胞内甘油三酯和细胞因子的产生
    讨论
        一、PA及 PA诱导的NASH模型的相关研究
        二、JNK/Nox4 通路的相关研究及机制
        三、JNK/NFκB通路的相关研究及机制
        四、参附注射液(SF)的相关研究及应用进展
    结论
    附图表
    参考文献
第二部分 参附注射液能显著改善脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤
    引言
    材料和方法
        一、实验试剂与器材
            (一)实验试剂
            (二)实验器材
        二、细胞培养和处理
        三、细胞凋亡检测：TUNEL法
        四、Albumin influx assay(白蛋白渗透性测定法)
        五、DCF assay：活性氧(ROS)测定
        六、Quantitative RT-PCR(实时定量PCR)：检测转录水平的细胞因子的表达
        七、Western blot：检测IκBα和 NFκB/p65 的表达
        八、统计学分析
    结果
        一、LPS诱导HIEC-6 细胞损伤
        二、ROS增多在LPS处理的HIEC-6 细胞损伤中起关键作用
        三、LPS通过ROS介导的NFκB信号诱导HIEC-6 细胞损伤
        四、参附注射液(SF)在LPS处理的细胞中通过对ROS和 NFκB活性的抑制来保护HIEC-6 细胞
    讨论
    结论
    附图表
    参考文献
附录
致谢
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本文编号：3192743