RNA干扰抑制大鼠肝星状细胞CTGF表达的实验研究

发布时间：2021-06-05 06:38

　　目的构建针对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的RNA干扰重组质粒及其对照质粒,将其转染到体外培养的大鼠肝星状细胞（Hepatic Stellate Cells,HSC）中,进一步应用Real-time PCR方法检测CTGFmRNA的表达,观察RNA干扰对大鼠肝星状细胞CTGF表达的抑制作用,为临床基因治疗提供依据。方法①利用pGCsi载体构建介导CTGF短发夹RNA（shRNA）表达的质粒重组体,并通过基因测序分析进行鉴定。②将构建成功的4组重组质粒转染大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,另设空白对照组,48 h后,共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）表达,分析转染效果。③检测CTGFmRNA表达水平,筛选出有效抑制CTGF表达的序列。④应用SPSS 17.0软件对数据进行方差分析。结果成功构建了能表达CTGFshRNA的三组重组体pGCsi-CTGFshRNA。pGCsi-CTGFshRNA成功转染到肝星状细胞中。与空白对照组相比,pGCsi-CTGFshRNA1组及pG... 

【文章来源】：中国医学工程. 2013,21(05)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

质粒构建载体示意图

.Connectivetissuegrowthfactormediatestransforminggrowthfactorbeta-inducedcollagensynthesis:down-regulationbycAMP[J].FASEBJ,1999,13(13):1774-1786.[5]SedlaczekN,JiaJD,BauerM,etal.Proliferatingbileductepithelialcellsareamajorsourceofconnectivetissuegrowthfactorinratbiliaryfibrosis[J].AmJPathol,2001,158(4):1239-1244.[6]GeorgeJ,TsutsumiM.siRNA-mediatedknockdownofconnectivetissuegrowthfactorpreventsN-nitrosodimethylamine-inducedhepaticfibrosisinrats[J].GeneTher,2007,14(10):790-803.图2pGCsi-CTGFshRNA1质粒(a)，pGCsi-CTGFshRNA2质粒(b)，pGCsi-CTGF-shRNA3质粒(c)及pGCsi-CTGFshRNAHK质粒(d)(阴性对照质粒)分别转染HSC-T648h后绿色荧光蛋白表达检测结果。abcd

.Connectivetissuegrowthfactormediatestransforminggrowthfactorbeta-inducedcollagensynthesis:down-regulationbycAMP[J].FASEBJ,1999,13(13):1774-1786.[5]SedlaczekN,JiaJD,BauerM,etal.Proliferatingbileductepithelialcellsareamajorsourceofconnectivetissuegrowthfactorinratbiliaryfibrosis[J].AmJPathol,2001,158(4):1239-1244.[6]GeorgeJ,TsutsumiM.siRNA-mediatedknockdownofconnectivetissuegrowthfactorpreventsN-nitrosodimethylamine-inducedhepaticfibrosisinrats[J].GeneTher,2007,14(10):790-803.图2pGCsi-CTGFshRNA1质粒(a)，pGCsi-CTGFshRNA2质粒(b)，pGCsi-CTGF-shRNA3质粒(c)及pGCsi-CTGFshRNAHK质粒(d)(阴性对照质粒)分别转染HSC-T648h后绿色荧光蛋白表达检测结果。abcd

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗结缔组织生长因子小分子干扰RNA防治大鼠肝纤维化研究[J]. 李光明,谢青,史毅,李定国,张明均,徐芹芳,姜山,周惠娟,金由辛.  中华消化杂志. 2005(06)



本文编号：3211643