C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒感染模型中细胞因子研究
发布时间：2021-06-08 03:50
背景与目的建立C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒HBV感染的动物模型,参考基因芯片结果,检测模型肝组织中趋化因子IL-18、Mig、IP-10、CXCL12、CCR7、CCL19及部分急性期蛋白基因、免疫相关蛋白的基因表达差异,为进一步研究炎性因子在HBV感染中作用及其机制奠定基础。实验方法1.建立C57BL/6小鼠HBV感染的动物模型:pBluescript-HBV质粒转化超级感受态细菌DH5α,提取大量质粒,高压水动力法于小鼠尾静脉注射,建立感染模型,同时设立空载对照组（pBluescript）动物模型。2.建模第4天取模型动物外周血,ELISA试剂盒检测外周血中HBsAg的表达水平,验证感染模型是否成功建立,收取肝组织冻存。3.参考基因芯片检测结果,挑选感兴趣的差异表达趋化因子,设计引物。Trizol法提取肝组织总RNA,逆转录为cDNA,Real-time PCR检测实验组和对照组对应因子的基因拷贝数量,RT-PCR凝胶电泳分析。4.免疫组织化学法对表达差异较明显的因子IP-10进行检测。结果1.HBV感染C57BL/6小鼠模型的建立:ELISA检测尾静脉高压注射HBV C57BL...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
空载组和实验室的比较分析散点图
图 2. ELISA 检测 HBsAg 表达Negtive(-)：试剂盒内阴性样品，Positive(+)：试剂盒内阳性样本，norm未处理小鼠，pBluescript：pBluescript 注射小鼠模型，pBluescript-HBVpBluescript-HBV 注射小鼠模型。三、HBV 感染模型鼠趋化因子的表达1. Real-time PCR 结果Trizol 法提取组织中总 RNA，逆转录酶将 RNA 逆转录为 cDNA，在 96 孔板式 PCR 仪器上 58℃退火扩增基因，以各组的 β-actin 为内参进行数据整理。3 结果可见溶解曲线显示为单峰，图 4 结果显示扩增曲线的上升期在 15-30cy之间，表明实验引物间无二聚体形成，实验结果可靠，可以作为分析参考数据
图 5 空载组（pBluescript）和实验组（pBluescript-HBV）趋化因子的表. RT-PCR 结果为验证 Real-time PCR 结果，设计针对差异表达明显的 IL18，Mig， IPxcl12，Ccl19，Ccr7 引物，以 Trizol 法提取组织中的总 RNA 为模板，进一 RT-PCR 扩增目的基因，同时扩增 β-actin 基因。PCR 扩增产物经琼脂糖泳，结果如图 6 所示，在泳道 1 和泳道 8 近 200bp 处可见扩增条带，与-actin171bp 大小一致。在泳道 9-14 可见 300-400bp 扩增条带，分别与引物增的 IL-18（395bp），Mig（487bp），IP-10（403bp），cxcl12（377bp），422bp），ccr7（380bp）大小相符，提示 HBV 感染模型组均有上述趋化因达，与定量 PCR 所测目的基因表达变化趋势一致，而空载 pBluescript 组因子的表达，RT-PCR 结果亦表明 HBV 感染可诱导肝细胞表达 IL18，MP10，Cxcl12，Ccl19，Ccr7。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J]. Juan R Larrubia,Selma Benito-Martínez,Miryam Calvino,Eduardo Sanz-de-Villalobos,Trinidad Parra-Cid. World Journal of Gastroenterology. 2008(47)
本文编号：3217631
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
空载组和实验室的比较分析散点图
图 2. ELISA 检测 HBsAg 表达Negtive(-)：试剂盒内阴性样品，Positive(+)：试剂盒内阳性样本，norm未处理小鼠，pBluescript：pBluescript 注射小鼠模型，pBluescript-HBVpBluescript-HBV 注射小鼠模型。三、HBV 感染模型鼠趋化因子的表达1. Real-time PCR 结果Trizol 法提取组织中总 RNA，逆转录酶将 RNA 逆转录为 cDNA，在 96 孔板式 PCR 仪器上 58℃退火扩增基因，以各组的 β-actin 为内参进行数据整理。3 结果可见溶解曲线显示为单峰，图 4 结果显示扩增曲线的上升期在 15-30cy之间，表明实验引物间无二聚体形成，实验结果可靠，可以作为分析参考数据
图 5 空载组（pBluescript）和实验组（pBluescript-HBV）趋化因子的表. RT-PCR 结果为验证 Real-time PCR 结果，设计针对差异表达明显的 IL18，Mig， IPxcl12，Ccl19，Ccr7 引物，以 Trizol 法提取组织中的总 RNA 为模板，进一 RT-PCR 扩增目的基因，同时扩增 β-actin 基因。PCR 扩增产物经琼脂糖泳，结果如图 6 所示，在泳道 1 和泳道 8 近 200bp 处可见扩增条带，与-actin171bp 大小一致。在泳道 9-14 可见 300-400bp 扩增条带，分别与引物增的 IL-18（395bp），Mig（487bp），IP-10（403bp），cxcl12（377bp），422bp），ccr7（380bp）大小相符，提示 HBV 感染模型组均有上述趋化因达，与定量 PCR 所测目的基因表达变化趋势一致，而空载 pBluescript 组因子的表达，RT-PCR 结果亦表明 HBV 感染可诱导肝细胞表达 IL18，MP10，Cxcl12，Ccl19，Ccr7。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J]. Juan R Larrubia,Selma Benito-Martínez,Miryam Calvino,Eduardo Sanz-de-Villalobos,Trinidad Parra-Cid. World Journal of Gastroenterology. 2008(47)
本文编号：3217631
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3217631.html
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