CXCL12/CXCR4在肝纤维化组织中表达及其作用机制研究

发布时间：2021-06-12 02:49

　　目的研究显示CXC趋化因子配体12（Chemokine C-X-C motif ligand12, CXCL12）及其受体CXC趋化因子受体4（Chemokine C-X-C motif receptor4, CXCR4）与多种慢性肝脏疾病存在着一定的联系。本研究通过检测肝纤维化组织中CXCL12-CXCR4在转录及蛋白水平的表达，再利用体外实验研究CXCL12-CXCR4对人肝星状细胞（Hepatic stellate cell，HSC）的作用及趋化影响，分析CXCL12-CXCR4生物轴在肝纤维化进程中的作用。方法收集正常人（n=8）和乙肝肝纤维化（n=20）肝组织标本，置于-80℃保存。Trizol法提取人肝组织标本总RNA，逆转录成cDNA。设计引物，分别扩增内参β-actin、CXCL12α、CXCL12β及CXCR4特异序列片段，连接T载体。将重构质粒转入感受态细胞中后，筛选出目的质粒，并进行质粒小提、定量。分别以4种质粒为标准品，建立实时荧光定量PCR（Q-PCR）对肝组织中CXCL12α、CXCL12β和CXCR4的转录表达进行检测。利用人肝组织冰冻切片，以免疫组化方法... 

【文章来源】：首都医科大学北京市

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RNA完整性鉴定

图 2结果发现，CXCL12α，CXCL12β 和 CXCR4 在肝组织内均有表达，CXCL12α的表达量高于 CXCL12β 。把 CXCL12α、CXCL12β 和 CXCR4 的定量值比上各自相对应标本的内参定量值（β -actin）计算出相对定量值，比较其在纤维化组（N=20）和正常组（N=8）中的差异。经分析，CXCR4 在肝纤维化组中的表达明显大于正常肝组织，差异具有统计学意义（P=0.019）。 CXCL12α 和 CXCL12β 在纤维化组的表达量均值均大于正常组，但在两组间的差异无统计学意义， P值分别为 0.186，0.722，如图 3 所示。

图 3 CXCL12α、CXCL12β 及 CXCR4 的 Q-PCR 实验结果用免疫组化对 CXCR4 和 CXCL12 在肝组织中的表达进行定CXCR4在人肝组织中的表达情况利用免疫组化技术对人肝组织切片进行染色，标记 CXCR4，利用苏木素染细胞核进染色定位。结果发现，CXCR4 在正常组织中表达较少，主要在胆上皮有表达。在肝纤维化组织中，CXCR4 在假小叶边缘纤维间隔区域染色明显较深，表高。另外，CXCR4 在在纤维化组织中增生的胆小管上皮细胞也有表达，如

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控[J]. 黄艳,黄成,李俊.  中国药理学通报. 2010(01)
[2]瘦素在实验性大鼠肝纤维化发生中的作用机制研究[J]. 农兵,罗和生,梁增文,黄振录.  华夏医学. 2006(03)



本文编号：3225795