HucMSC-Ex调控neddylation修复炎症性肠病的机制研究
发布时间：2021-06-17 12:21
目的:通过建立人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex）修复葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt,DSS）诱导的小鼠炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）模型,确定neddylation在hucMSC-Ex缓解小鼠IBD中的作用,深入研究hucMSC-Ex在调控neddylation修复小鼠IBD中的作用机制,进一步运用hucMSC-Ex治疗IBD。方法:1)HucMSC-Ex的分离鉴定:收集人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC）培养上清液,通过相应试剂提取hucMSC-Ex并使用透射电镜、Nano Sight和western blot进行相关鉴定。2)选取6周、20g左右的雄性BABL/C小鼠,饮用含3%DSS的水以构建IBD模型。为明确hucMSC-Ex是否通过调控neddylation来缓解小鼠IBD,...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HucMSC-Ex的鉴定
江苏大学硕士学位论文21图3.1HucMSC-Ex定位受损的小鼠结直肠组织(A)DIR标记的hucMSC-Ex在小鼠体内的荧光分布；(B)DIR标记的hucMSC-Ex在小鼠结直肠组织内的荧光分布。Figure3.1HucMSC-Exlocalizedatdamagedmousecolontissue(A)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmouse;(B)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmousecolontissue.3.3.2.HucMSC-Ex缓解DSS诱导的小鼠IBD为了验证hucMSC-Ex对DSS诱导的小鼠IBD是否具有缓解作用，我们构建了动物模型。结果表明，Neg组小鼠随着时间的推进体重也随之上升，但是DSS组小鼠在第5天出现体重下降，同时也有血便出现，hucMSC-Ex组小鼠在前6天体重基本没有变化，第6天后体重略有下降，但不明显（图3.2A）。3组小鼠DAI在前5天均无上升变化，DSS组小鼠在第6天时DAI急剧上升，并且呈持续上升趋势，hucMSC-Ex组小鼠在第6天时DAI也开始上升，但之后又呈现下降趋势（图3.2B）。处死所有小鼠后，取其结直肠组织，观察发现Neg组小鼠结直肠组织较长，DSS组小鼠的结直肠明显缩短，而经hucMSC-Ex处理后，小鼠的结直肠长度有所恢复（图3.2C）。H&E染色结果显示DSS诱导小鼠肠道炎症后，小鼠肠绒毛结构严重破坏，hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织结构完整性有所恢复（图3.2D）。QRT-PCR结果显示相对于Neg组小鼠，促炎因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）在DSS组小鼠结直肠组织中表达增加，在hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织中表达显著降低，相反，抗炎因子（IL-10）在DSS组小鼠结直肠组织中表达降低，在hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织中表达增加（图3.2E），其表达均有统计学意义（P<0.05）。以上结果均表明hucMSC-Ex可以有效缓解DSS诱导的小鼠IBD。
HucMSC-Ex调控neddylation修复炎症性肠病的机制研究22图3.2HucMSC-Ex缓解DSS诱导的小鼠IBD(A)小鼠体重变化；(B)小鼠DAI评分；(C)小鼠结直肠外观；(D)小鼠结直肠组织H&E染色（标尺=50μm）；(E)QRT-PCR分析小鼠结直肠组织中炎症因子表达水平，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA。Figure3.2HucMSC-ExrelievedDSS-inducedmouseIBD(A)Changesinmiceweight;(B)DAIscoresinmice;(C)Colonappearanceinmice;(D)H&Estaininginmicecolontissue(scalebar=50μm);(E)QRT-PCRanalysisofinflammatoryfactorsexpressioninmicecolontissue,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA.3.4.讨论外泌体作为各通信系统中的一种新介质，参与细胞间信息传递与信号通路的调节[115]。由于其广泛的性能，外泌体已经成功应用于不同领域，如肿瘤生物学、免疫学和再生医学[116]。在肠粘膜中，促炎因子与抑炎因子间的平衡被打破是引起炎症的重要机制。肠道一旦受到刺激，巨噬细胞被激活，继而分泌促炎因子：IL-1β、IL-6、IL-8以及TNF-α，IL-8募集中性粒细胞浸润于肠粘膜，同时导致中性粒细胞的激活，释放出大量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS），进一步促进放大炎症反应[117]。近年来一些研究表明，肠上皮细胞来源的外泌体通过ANXA1修复肠粘膜损伤[118]，骨髓来源的DC分泌的外泌体可以缓解2,4,6-三硝
【参考文献】：
期刊论文
[1]Enhancing survival, engraftment, and osteogenic potential of mesenchymal stem cells[J]. Daniel García-Sánchez,Darío Fernández,José C Rodríguez-Rey,Flor M Pérez-Campo. World Journal of Stem Cells. 2019(10)
[2]Inflammatory bowel disease and cancer: The role of inflammation, immunosuppression, and cancer treatment[J]. Jordan E Axelrad,Simon Lichtiger,Vijay Yajnik. World Journal of Gastroenterology. 2016(20)
[3]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
本文编号：3235184
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HucMSC-Ex的鉴定
江苏大学硕士学位论文21图3.1HucMSC-Ex定位受损的小鼠结直肠组织(A)DIR标记的hucMSC-Ex在小鼠体内的荧光分布；(B)DIR标记的hucMSC-Ex在小鼠结直肠组织内的荧光分布。Figure3.1HucMSC-Exlocalizedatdamagedmousecolontissue(A)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmouse;(B)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmousecolontissue.3.3.2.HucMSC-Ex缓解DSS诱导的小鼠IBD为了验证hucMSC-Ex对DSS诱导的小鼠IBD是否具有缓解作用，我们构建了动物模型。结果表明，Neg组小鼠随着时间的推进体重也随之上升，但是DSS组小鼠在第5天出现体重下降，同时也有血便出现，hucMSC-Ex组小鼠在前6天体重基本没有变化，第6天后体重略有下降，但不明显（图3.2A）。3组小鼠DAI在前5天均无上升变化，DSS组小鼠在第6天时DAI急剧上升，并且呈持续上升趋势，hucMSC-Ex组小鼠在第6天时DAI也开始上升，但之后又呈现下降趋势（图3.2B）。处死所有小鼠后，取其结直肠组织，观察发现Neg组小鼠结直肠组织较长，DSS组小鼠的结直肠明显缩短，而经hucMSC-Ex处理后，小鼠的结直肠长度有所恢复（图3.2C）。H&E染色结果显示DSS诱导小鼠肠道炎症后，小鼠肠绒毛结构严重破坏，hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织结构完整性有所恢复（图3.2D）。QRT-PCR结果显示相对于Neg组小鼠，促炎因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）在DSS组小鼠结直肠组织中表达增加，在hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织中表达显著降低，相反，抗炎因子（IL-10）在DSS组小鼠结直肠组织中表达降低，在hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织中表达增加（图3.2E），其表达均有统计学意义（P<0.05）。以上结果均表明hucMSC-Ex可以有效缓解DSS诱导的小鼠IBD。
HucMSC-Ex调控neddylation修复炎症性肠病的机制研究22图3.2HucMSC-Ex缓解DSS诱导的小鼠IBD(A)小鼠体重变化；(B)小鼠DAI评分；(C)小鼠结直肠外观；(D)小鼠结直肠组织H&E染色（标尺=50μm）；(E)QRT-PCR分析小鼠结直肠组织中炎症因子表达水平，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA。Figure3.2HucMSC-ExrelievedDSS-inducedmouseIBD(A)Changesinmiceweight;(B)DAIscoresinmice;(C)Colonappearanceinmice;(D)H&Estaininginmicecolontissue(scalebar=50μm);(E)QRT-PCRanalysisofinflammatoryfactorsexpressioninmicecolontissue,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA.3.4.讨论外泌体作为各通信系统中的一种新介质，参与细胞间信息传递与信号通路的调节[115]。由于其广泛的性能，外泌体已经成功应用于不同领域，如肿瘤生物学、免疫学和再生医学[116]。在肠粘膜中，促炎因子与抑炎因子间的平衡被打破是引起炎症的重要机制。肠道一旦受到刺激，巨噬细胞被激活，继而分泌促炎因子：IL-1β、IL-6、IL-8以及TNF-α，IL-8募集中性粒细胞浸润于肠粘膜，同时导致中性粒细胞的激活，释放出大量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS），进一步促进放大炎症反应[117]。近年来一些研究表明，肠上皮细胞来源的外泌体通过ANXA1修复肠粘膜损伤[118]，骨髓来源的DC分泌的外泌体可以缓解2,4,6-三硝
【参考文献】：
期刊论文
[1]Enhancing survival, engraftment, and osteogenic potential of mesenchymal stem cells[J]. Daniel García-Sánchez,Darío Fernández,José C Rodríguez-Rey,Flor M Pérez-Campo. World Journal of Stem Cells. 2019(10)
[2]Inflammatory bowel disease and cancer: The role of inflammation, immunosuppression, and cancer treatment[J]. Jordan E Axelrad,Simon Lichtiger,Vijay Yajnik. World Journal of Gastroenterology. 2016(20)
[3]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
本文编号：3235184
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