乙型肝炎病毒慢性感染小鼠模型的建立及初步应用

发布时间：2021-07-09 17:26

　　目的：1．构建中国地区流行的B基因型HBV可复制性克隆，验证其在体内和体外的复制能力，为HBV复制相关研究及建立细胞和动物模型奠定基础。2．将具有良好复制能力的B基因型中国株HBV可复制性克隆亚克隆到腺相关病毒载体内，建立HBV慢性感染小鼠模型，同时建立A基因型HBV慢性感染小鼠模型。3．通过高压尾静脉注射的方法将逆转录病毒和非病毒shRNA表达载体导入到小鼠体内，比较其抗HBV的时效，以期获得较长期的HBV抑制效果。方法：1．以一例中国HBV B基因型感染患者来源的全基因克隆为母板，使用SapⅠ将HBV基因组切下后在体外自身环化。使用环化后的基因组为模板分两段分别扩增HBV1.3倍基因组片段，依次将其连接到克隆载体pBluescriptⅡKS（+）上获得含HBV1.3基因组的克隆。通过转染Huh7细胞系和高压尾静脉注射BAL B／cJ小鼠建立体外和体内HBV复制模型，采用ELISA、Southern Blot、Northern Blot以及免疫组织化学染色等方法检测HBV抗原分泌、复制中间体、转录子、抗原肝细胞内表达等情况，评价构建克隆的复制能力。2．将复制能力良好的HBV1.3倍基... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pBs一HBvl.3可复制性克隆构建流程图

N︶V6。山工…找lZd3d4ds转染后天数转染后HBSAgHBeAg分泌情况细胞的总DNA和RNA分别进行S的第1、3、5天均可检测到RC、D、2.4/2.IKb、O.7Kb的转录子。表DNA

A:感染性克隆注射组;B:感染性克隆注射组一抗空白;C:阳性对照;D:生理盐水注射组图5.HBcAg在HBV急性感染小鼠模型肝脏中的表达情况(x200)构建克隆高压注射小鼠后第4天取肝组织检测HBcAg表达情况，结果可见HBc小鼠肝细胞内正常表达，呈胞浆型和胞核型表达。而感染性克隆注射一抗空白水注射组没有阳性信号。v急性感染小鼠模型血清中HBV分泌情况检测一闷卜一HBVI.3质粒组~对照组08︵6OnU1.+++﹄卜︺EE︸日nll︺八曰︵曰曰\s。艺。己1.OE+041.OE+02OE+00.-一一一一一一月.一一一~一.-.VOAZ山H

【参考文献】：
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本文编号：3274166