刀豆蛋白A致小鼠急性肝损伤IL-6介导的miR-674-5p/5-LO调控机制研究

发布时间：2021-07-10 01:33

　　研究背景与目的：肝炎的发生发展是一个复杂的病理过程,其中病理性免疫反应引发肝组织中众多细胞因子和炎症介质异常分泌发挥了关键作用。花生四烯酸经由5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LO）代谢通路激活的炎性终产物与各种肝损伤密切相关,但5-LO通路在刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）诱导急性肝炎被激活的调控机制仍远未阐明。本研究采用经典的Con A诱导小鼠T细胞介导的肝损伤,模拟人类自身免疫反应性肝炎。重点探索Con A诱发小鼠肝急性损伤始发阶段,若干关键的细胞因子和炎症介质产生的转录后调控机制,力图为阐明免疫性肝炎急性期病理机制提供实验依据。方法：雄性Balb/c小鼠随机分为5组,每组6只。除溶剂对照组尾静脉注射生理盐水外,其他几组动物均尾静脉注射Con A （20mg/kg）,2h处死。对上述损伤肝组织进行microRNAs （miRNAs）表达谱检测及qRT-PCR验证,筛选出差异表达的miRNAs （变化>1.5倍,P<0.05）。通过对差异表达miRNAs的生物信息学预测和分析,推测存在潜在负向调控的“miRNA-靶蛋白”对,并采用肝... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
前言
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 Con A诱导肝损伤早期miRNAs表达谱特征及生物信息学分析
    引言
    1.1 仪器和试剂
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 实验模型构建
        1.2.2 miRNA表达谱芯片检测
        1.2.3 miRNA表达变化的qRT-PCR验证
        1.2.4 miRNA靶基因的生物信息学预测和分析
    1.3 实验结果
        1.3.1 miRNA芯片筛选和数据分析
        1.3.2 针对miRNAs设计qRT-PCR发夹结构引物
        1.3.3 miRNA表达水平的qRT-PCR验证
        1.3.4 靶基因的预测和同源分析
    1.4 讨论
    1.5 小结
第二部分 炎症因子微环境中miR-674-5p对5-LO转录后调控
    引言
    2.1 仪器和试剂
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 常用溶液配制
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 miRNA-674-5p类似物的转染
        2.2.3 炎症因子刺激后5-LO表达水平的检测
            2.2.3.1 蛋白样本收集
            2.2.3.2 蛋白浓度测定
            2.2.3.3 蛋白免疫印迹
            2.2.3.4 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 Hepa1-6小鼠肝细胞中“miR-674-5p/5-LO”的负向调控
        2.3.2 HepG2人肝细胞中“miR-674-5p/5-LO”的负向调控
    2.4 讨论
    2.5 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
附录
综述
    参考文献
作者简历及在学期间所获得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Serum levels of microRNAs can specifically predict liver injury of chronic hepatitis B[J]. Hui Zhang, Qing-Ya Li, Zhi-Zhong Guo, Yan Guan, Jia Du, Yi-Yu Lu, Shi-Bing Su, Research Center for Traditional Chinese Medicine Complexity System, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China Yi-Yang Hu, Ping Liu, Institute of Liver Disease, Shanghai Shuguang Hospital, Shanghai 201203, China Shuang Huang, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Georgia Health Sciences University, Augusta, GA 30912, United States.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[2]MicroRNA signatures in liver diseases[J]. Xian-Ming Chen, Department of Medical Microbiology and Immunology, Creighton University Medical Center, CrissⅡ Room 529, 2500 California Plaza, Omaha, NE 68178,United States.  World Journal of Gastroenterology. 2009(14)
[3]Enhanced expressions and activations of leukotriene C4synthesis enzymes in D-galactosamine/lipopolysaccharide-induced rat fulminant hepatic failure model[J]. Kui-Fen Ma, Hong-Yu Yang, Zhe Chen, Luo-Yang Qi, Dan-Yan Zhu, Yi-Jia Lou, Institute of Pharmacology & Toxicology and Biochemical Pharmaceutics, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(17)
[4]HBV整合引起HepG2细胞microRNA表达谱变化分析[J]. 韩俊峰,阮志华,张蓓,吴玉章.  第三军医大学学报. 2007(22)



本文编号：3274911