人肝细胞生长因子基因修饰人骨髓间充质干细胞的实验研究

发布时间：2021-07-14 13:50

　　背景和目的:肝纤维化（hepatic fibrosis）是慢性肝病发展为肝硬化的重要中间环节,目前认为,这个阶段的肝脏病变是可逆的,但若没有及时有效治疗,则最终发展为不可逆转的肝硬化、甚至肝癌。细胞移植成为治疗肝纤维化的新策略。骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）具有自我更新能力,在合适的微环境里可多系横向分化,可以被诱导分化为肝细胞修复损伤肝组织。肝细胞生长因子（ Hepatocyte growth factor, HGF）是一种具有较强的抗纤维化和抗凋亡活性的多功能因子,参与机体多种器官组织的生长、再生和重塑等过程。HGF可以调控BMSCs向肝细胞分化,促进肝细胞增殖。关于HGF基因修饰BMSCs是否促进诱导其向肝样细胞分化,目前国内外尚未见报道。本实验构建了HGF基因的真核表达载体,利用HGF基因转染BMSCs对其进行基因修饰。研究HGF表达或增强其表达后对诱导BMSCs向肝样细胞分化的影响,为进一步研究HGF基因及BMSCs治疗肝纤维化及以后的临床应用奠定基础。方法:⑴Percoll密度梯度离心法联合贴壁法从成人骨髓血中分离BM... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BMSCs生长曲线

13图 3 流式细胞仪鉴定 BMSCs 表面标志Fig3 The surface marker of BMSCs were detected by flow cyctometry3.4 BMSCs 诱导分化3.4.1 BMSCs 的成脂诱导分化BMSCs 成脂诱导后，第 3 天部分细胞逐渐变为圆形，镜下观察可见细胞立体感增强，7 天后可见胞浆内出现折光性强的圆形脂滴，并相互融合，细胞由长梭形变为圆形或多边形，诱导 10d，细胞形态变成多角状，胞浆内大量空泡。诱导 13油红 O 染色显示有脂肪细胞被染成红色，提示有脂质沉积。未诱导的细胞无此变化；说明 BMSCs 在体外有向成脂细胞诱导分化的能力（见图 4）。3.4.2 BMSCs 的成骨诱导分化

8) 将柱子套在一干净的 1.5ml 离心管中，加入 50μlTE 缓冲液至柱子的膜中央。室温放置 2min，10,000×g 离心 1min 以洗脱 DNA。得到的质粒溶液，-20℃保存备用。紫外分光光度仪测定质粒含量和纯度，测得 A260/A280 在1.8-2.0 之间，含量大于 400ng/μl 满足要求。2.1.5 pEGFP-N1 载体的提取pEGFP-N1 载体的扩增及提取方法步骤同 2.1.3 和 2.1.4。-20℃保存备用。2.2 hHGF 基因片段的扩增

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组hTGF-β1基因转染的BMSCs在体内成软骨能力的初步研究[J]. 夏万尧,王毅敏,刘伟,丁文龙,钟梅芳,周广东,崔磊,曹谊林.  解剖科学进展. 2010(04)
[2]骨髓基质干细胞转基因治疗兔股骨头无菌性坏死的研究[J]. 陈超,张彦陵,马保安.  现代医药卫生. 2006(14)
[3]肝病患者血清诱导人骨髓间充质干细胞表达甲胎蛋白和白蛋白的实验研究[J]. 赵文静,陈亚洁,赵振国,刘薇,刘淑荣,孙庆国,陈曦.  中华肝脏病杂志. 2006(04)
[4]共同培养诱导骨髓基质干细胞向肝细胞分化的研究[J]. 张刚庆,方驰华,池达智.  中华肝脏病杂志. 2005(09)
[5]增强型绿色荧光蛋白基因电穿孔转染骨髓间充质干细胞的研究[J]. 王晓军,崔连群,王敏,刘继东,李峰,盖玉生.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2005(01)
[6]骨髓间充质干细胞预构人工骨对兔股骨头坏死的修复作用[J]. 张晔,曾炳芳,张长青,王建华,袁霆.  中国临床康复. 2004(20)
[7]hBMP7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响[J]. 金丹,裴国献,齐凤菊,胡罢生,魏宽海,王珂,陈滨.  解放军医学杂志. 2002(06)



本文编号：3284267