ChREBP及其靶基因PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用

发布时间：2017-04-26 14:22

  本文关键词：ChREBP及其靶基因PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是肝细胞中积聚大量甘油三酯而造成的临床病理综合征，NAFLD包含非酒精性单纯性脂肪肝（nonalcoholic simple fatty liver,NAFL）、脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)和NASH相关肝纤维化，肝硬变和肝癌。随着人们生活和饮食的习惯的变化，越来越多的人患有非酒精性脂肪肝疾病，可能最终是发展为肝硬化的结果。非酒精性脂肪性肝病现已成为了常见的肝病之一，严重危害着人们的生命健康。所以要阐明非酒精性脂肪性肝病得发病机制，在理论和临床路径的选择上对其诊疗有非常重要的价值。但是NAFLD的详细发病机理目前还没彻底阐明，往往与胰岛素抵抗综合征(insulin-risistantsymdrome,IRS)或代谢综合征((metabolic syndrome,MS)相关，如肥胖、高脂血症、糖尿病等，可能是多种因素如遗传环境、代谢应激等所导致。在最近几年中，已经有研究证实NAFLD发病机制的中心环节是异常的脂肪代谢和胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）。ChREBP及其靶基因PNPLA3是胰岛素抵抗的发生发展中的关键因素，近年很多研究发现ChREBP以及其靶基因PNPLA3可以增加NAFLD的发病易感性，与胰岛素抵抗、肝炎、肝纤维化的发生发展密切联系，参与NAFLD的发病机制，对于研究ChREBP与PNPLA3的相互关系以及它们是否通过胰岛素抵抗参与NAFLD的发病，目前的相关研究报道较少。本实验主要是运用高脂饲料建立非酒精性脂肪性肝病的大鼠模型，观测ChREBP及其靶基因PNPLA3在大鼠肝组织中的表达情况并探讨它们在NAFLD发病机理中的作用，这对于完善非酒精性脂肪性肝病的发病机制具有重要的理论价值，对于非酒精性脂肪性肝病的治疗也具有重要的临床价值。方法：实验中，用48只180g至220g重的成年雄性SD大鼠，给予一周时间的适应饲养，然后随机分成2组：对照组24只(普通饲料饲养)和非酒精性脂肪性肝病模型组24只（高脂饮食饲养），各只大鼠均自由饮水和进食饲料，室温(20±2)℃，自然光线明暗交替各12小时，并观察大鼠体重、体长和大鼠食欲、皮肤、毛发状况。随机分组后在第4周末，第8周末和第12周末分阶段处死两组大鼠中各8只，对大鼠的下腔静脉取血，并测天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglycerides,TG）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）及空腹血胰岛素（fasting serum insulin,FINS）水平；然后在根据FBG、FINS的结果计算胰岛素的敏感指数（insulinsensitivity index,ISI，ISI=ln[1／(FBG×FINS)]）。用HE染色进行大鼠肝脏组织染色，光镜下观测肝脏组织病理变化，评估肝脏脂肪变性、炎症活动度和纤维化程度；并在大鼠肝脏组织切片行免疫染色后，测ChREBP、ACC的蛋白表达水平；用RT-PCR技术检测肝脏ChREBP基因、PNPLA3基因的mRNA水平的表达。结果：1、成功的建立了大鼠NAFLD模型，对照组大鼠肝小叶结构清晰完整，肝索呈放射状分布于中央静脉周围；各项生化指标均在正常范围；肝组织内可见少量ChREBP、ACC蛋白的表达；2、与对照组相比，模型组大鼠的体重增加，肝脏显著增大，肝细胞内可见脂滴，并随着建模的时间的增加肝细胞脂肪变性的程度加重，还出现了不同程度的炎细胞浸润和坏死，血生化AST、ALT、TC和TG水平与对照组同期相比均明显升高(P0.05)，并随着饲喂大鼠的时间的增加而升高(P0.05)，与同一时期对照组相比，，血FBG、FINS水平也显著上升(P0.05)，并随着饲喂大鼠的时间的增加而升高(P0.05)，ISI明显下降(P0.05)；3、与对照组相比，三期模型组大鼠的ChREBP、ACC蛋白和ChREBP、PNPLA3mRNA在肝组织中的表达增加，差异有显著意义(P0.05)，且随建模时间延长，其表达水平也显著增加(P0.05)。4、相关分析表明，模型组中，ChREBP基因的相对表达量与ACC和PNPLA3、血清AST、ALT水平、肝脏炎症活动度计分呈正相关(与ACC：r=0.409，P0.05，与PNPLA3：r=0.498，P0.05，与血清AST、ALT水平：r=0.677，P0.01，r=0.729，P0.01，与肝脏炎症活动度计分：r=0.566，P0.01），与IsI呈负相关(r=-0.611，P0.01)；PNPLA3mRNA的相对表达量与血清AST、ALT水平、肝脏炎症活动度计分呈正相关(与血清AST、ALT水平：r=0.663，P0.01，r=0.736，P0.01，与肝脏炎症活动度计分：r=0.478，P0.05），与IsI呈负相关(r=-0.694，P0.01)。结论：1．高脂肪的饮食可以成功建立大鼠NAFLD模型，出现转氨酶的升高、肥胖、高脂血症、胰岛素抵抗等多个特征。异常的脂代谢、胰岛素的抵抗（IR）和NAFLD有关。2．正常大鼠肝脏ChREBP、ACC蛋白表达量较低，NAFLD模型组大鼠肝脏ChREBP、ACC蛋白和ChREBP、PNPLA3mRNA表达增多，并随造模时间的延长，其表达显著增加，肝ChREBP的表达增加可能激活了如ACC、PNPLA3等一系列与脂质合成相关基因的表达,促进脂肪肝的形成。3．ChREBP及其靶基因PNPLA3与反映肝炎症程度、肝功能和胰岛素敏感指数等指标密切相关，可能是通过参与胰岛素抵抗的调控在NAFLD的发生发展过程中发挥重要作用。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝病 ChREBP基因 PNPLA3基因 胰岛素抵抗
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-21
• 1 实验材料与仪器13
• 2 主要实验试剂13-14
• 3 主要实验仪器14
• 4 实验方法14-20
• 5 统计方法20-21
• 结果21-29
• 1 一般情况21
• 2 血清生化指标的检测21-22
• 3 大鼠肝组织病理改变22-25
• 4 大鼠 ChREBP、ACC 免疫组化结果25-27
• 5 RT-PCR 技术测定大鼠肝脏中 PNPLA3 mRNA 的表达27-29
• 6 模型组 ChREBP 水平与各指标相关性分析29
• 讨论29-35
• 1. 非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）29-30
• 2. 胰岛素抵抗以及其与 NAFLD 的关系30
• 3. NAFLD 动物模型的选择30-31
• 4. ChREBP 及其靶基因 PNPLA3、ACC 与 NAFLD31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-50
• 英文缩略词对照50-51
• 致谢51-52
• 综述52-68
• 参考文献57-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 卢建雄;杨公社;陈粉粉;;TNF-α影响胰岛素对原代培养大鼠脂肪细胞增殖及生脂基因的转录表达[J];动物学报;2006年01期

2 李小山;何松;;ChREBP及其靶基因在高脂大鼠非酒精性脂肪肝中的表达[J];重庆医学;2011年21期

3 卢建雄;陈粉粉;杨公社;;调控糖酵解和生脂的重要转录因子:碳水化合物反应元件结合蛋白[J];生理科学进展;2006年03期

4 程维肖;赵和平;;动态观察非酒精性脂肪肝大鼠肝脏ChREBP的表达[J];山西医科大学学报;2009年04期

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本文编号：328631