Ca 2+ /CaM/CaMKⅡ信号通路在大鼠肝脏再生中的初步研究

发布时间：2021-07-16 17:59

　　第一部分 新生大鼠肝细胞的分离、培养与鉴定目的：建立一种简单、高效的新生大鼠肝细胞分离与培养的方法。方法：采用组织块-胶原酶消化法,经多步低速离心获取新生大鼠肝细胞,待体外培养的肝细胞呈克隆样生长形成细胞集落,应用RT-PCR和Western blot技术分别检测新生大鼠肝细胞中ALB、CK-18、CK-8和AFP的mRNA和蛋白表达情况,同时将同种新生大鼠肝组织、大鼠肝组织中作为参照,进行生物学功能鉴定。结果：分离的新生大鼠肝细胞体外培养,在倒置显微镜下可见细胞形态呈现为圆形,24h部分细胞贴壁,胞体伸展后,呈岛屿状,由圆球形转变为椭圆形,48h细胞进入增殖期,细胞呈不规则多边形上皮细胞特征,3d培养的肝细胞互相连接成片,同时胞体透明度减弱、轮廓增强,可见部分肝细胞呈双核或多核。5d细胞形态基本一致,呈克隆样生长彼此之间相互融合。RT-PCR技术检测新生大鼠肝细胞表达成熟肝细胞标记物ALB、CK-18、CK-8 mRNA:Western blot技术检测新生大鼠肝细胞表达成熟肝细胞标记物ALB、CK-18、CK-8蛋白。结论：成功分离、鉴定出了新生大鼠肝细胞,并可在体外条件下扩增培养... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：146 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图４大量真茵污染（Ｘ２００）

一般肉眼可见培养液浑浊，呈黄绿色。镜下可见满视野都是细菌颗粒，??同时可覆盖细胞，使得整个背景模糊，可能导致细胞死亡，及时应用双抗有效??进行预防，若较重则尽快丢弃细胞，如图５所示。Ｗ上两种污染在培养中较多见，??若污染较重应尽快丢弃细胞，同时按污染情况消毒培养箱和细胞间。??圓圓??图４大量真茵污染（Ｘ２００）?图５大量细菌污染（Ｘ２００）??２．２．２细胞冻存及复苏流程??（１）冻存液配制：ＤＭＥＭ培养基?５０％??胎牛血清?４０％??ＤＭＳＯ?１０％??２１??

图６转移夹居示意图??

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究[D]. 刘静.昆明医学院 2010

硕士论文
[1]Tmub1基因沉默对大鼠肝部分切除术后肝细胞增殖周期的影响[D]. 王保林.第三军医大学 2012



本文编号：3287488