HucMSC-Ex调控SUMO1缓解小鼠结肠炎炎症恶性转化的机制研究
发布时间：2021-07-23 10:48
目的:探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex）在氧化偶氮甲烷（Azoxymethane,AOM）与葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt,DSS）联合诱导的小鼠结肠炎恶性转化中的作用,明确SUMO1介导的SUMOylation在hucMSC-Ex缓解小鼠结肠炎恶性转化过程中的作用及机制。方法:1)hucMSC-Ex的分离鉴定:分离hucMSC,从hucMSC培养上清液中提取hucMSC-Ex,使用NanoSight、透射电镜和western blot等技术进行鉴定。2)选取6周,20g左右的雄性BABL/C小鼠,随机分为Normal组、AOM/DSS组、hucMSC-Ex组。除Normal组外,其余两组采用AOM/DSS诱导小鼠结直肠癌模型,hucMSC-Ex组于造模第10天、24天、38天予以hucMSC-Ex尾静脉注射治疗,并于第70天处死所有小鼠。观察小鼠体重、粪便性状、结直肠大体观,比较各组结直肠肿瘤成瘤率及个数,...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HucMSC-Ex的鉴定A.NanoSight纳米颗粒跟踪分析仪检测hucMSC-Ex直径大小；B.透射电镜观察hucMSC-Ex
HucMSC-Ex调控SUMO1缓解小鼠结肠炎恶性转化的机制研究20图3.2HucMSC-Ex减轻AOM/DSS诱导的小鼠结直肠癌的恶性程度A.小鼠体重变化；B.小鼠DAI指数；C.小鼠生存曲线；D.小鼠结直肠大体观；E.小鼠结直肠肿瘤观；F.小鼠肿瘤计数，***P<0.001；G.小鼠结直肠H&E染色（标尺=100μm）；H.小鼠结直肠PCNA免疫组织化学染色（标尺=100μm）。Figure3.2EffectofhucMSC-ExonAOM/DSS-inducedcolorectalcancerinmiceA.Mousebodyweightchange;B.MouseDAIindex;C.Mousesurvivalcurve;D.Mousecolorectalgrossview;E.Mousecolorectaltumorview;F.Mousetumorcount,***P<0.001;G.MouseColorectalH&Estaining(scalebar=100μm);H.MousecolorectalPCNAimmunohistochemicalstaining(scalebar=100μm).3.4.讨论外泌体是细胞内多囊泡体（multivesicularbody，MVB）与质膜融合之后释放的细胞外囊泡。其膜上携带有大量蛋白、RNA、miRNA以及胆固醇、神经酰胺、鞘磷脂和脂筏[108]。作为细胞间通讯的参与者，外泌体可携带生物活性分子转移到受体细胞中，介导细胞与细胞间的通信。外泌体的功能一部分源于其衍生细胞。多项研究已经证明MSC在组织再生中起重要作用，但由于移植物存活率低、免
HucMSC-Ex调控SUMO1缓解小鼠结肠炎恶性转化的机制研究26（图4.1A）。我们还发现在第7周AOM/DSS组小鼠已出现肿瘤，在第10周数量明显上升，而hucMSC-Ex组仅在第10周出现少量肿瘤（图4.1B）。我们统计了各组出现肿瘤的小鼠数量，发现在第10周hucMSC-Ex组较AOM/DSS组成瘤率稍低，而在第7周，仅AOM/DSS组出现肿瘤（图4.1C）。H&E染色结果显示AOM/DSS组小鼠肠绒毛结构严重破坏，hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织结构完整性有所恢复（图4.1D）。QRT-PCR显示，AOM/DSS组促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）高表达，而抑炎细胞因子（IL-10）低表达。HucMSC-Ex处理后明显下调了促炎细胞因子的表达，而抑炎细胞因子的表达水平也有所上升（图4.1E）。以上结果表明hucMSC-Ex可以缓解AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎恶性转化过程。图4.1HucMSC-Ex缓解AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎恶性转化过程A.不同时间点小鼠结直肠大体观；B.不同时间点小鼠肿瘤观；C.小鼠肿瘤发生率；D.不同时间点小鼠结直肠组织H&E染色（标尺=100μm）；E.QRT-PCR检测不同时间点小鼠结直肠炎症因子表达情况，**P<0.01;***P<0.001。Figure4.1HucMSC-ExalleviatestheAOM/DSS-inducedmalignanttransformationofcolitisinmiceA.Grossviewofmousecolorectalatdifferenttimepoints;B.Viewofmousetumoratdifferenttimepoints;C.Mousetumorincidence;D.H&Estainingofmousecolorectaltissueatdifferenttimepoints(scale=100μm);E.QRT-PCRtodetecttheexpressionofcolorectalinflammatory
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic value of innate and adaptive immunity in colorectal cancer[J]. Fabio Grizzi,Paolo Bianchi,Alberto Malesci,Luigi Laghi. World Journal of Gastroenterology. 2013(02)
本文编号：3299149
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HucMSC-Ex的鉴定A.NanoSight纳米颗粒跟踪分析仪检测hucMSC-Ex直径大小；B.透射电镜观察hucMSC-Ex
HucMSC-Ex调控SUMO1缓解小鼠结肠炎恶性转化的机制研究20图3.2HucMSC-Ex减轻AOM/DSS诱导的小鼠结直肠癌的恶性程度A.小鼠体重变化；B.小鼠DAI指数；C.小鼠生存曲线；D.小鼠结直肠大体观；E.小鼠结直肠肿瘤观；F.小鼠肿瘤计数，***P<0.001；G.小鼠结直肠H&E染色（标尺=100μm）；H.小鼠结直肠PCNA免疫组织化学染色（标尺=100μm）。Figure3.2EffectofhucMSC-ExonAOM/DSS-inducedcolorectalcancerinmiceA.Mousebodyweightchange;B.MouseDAIindex;C.Mousesurvivalcurve;D.Mousecolorectalgrossview;E.Mousecolorectaltumorview;F.Mousetumorcount,***P<0.001;G.MouseColorectalH&Estaining(scalebar=100μm);H.MousecolorectalPCNAimmunohistochemicalstaining(scalebar=100μm).3.4.讨论外泌体是细胞内多囊泡体（multivesicularbody，MVB）与质膜融合之后释放的细胞外囊泡。其膜上携带有大量蛋白、RNA、miRNA以及胆固醇、神经酰胺、鞘磷脂和脂筏[108]。作为细胞间通讯的参与者，外泌体可携带生物活性分子转移到受体细胞中，介导细胞与细胞间的通信。外泌体的功能一部分源于其衍生细胞。多项研究已经证明MSC在组织再生中起重要作用，但由于移植物存活率低、免
HucMSC-Ex调控SUMO1缓解小鼠结肠炎恶性转化的机制研究26（图4.1A）。我们还发现在第7周AOM/DSS组小鼠已出现肿瘤，在第10周数量明显上升，而hucMSC-Ex组仅在第10周出现少量肿瘤（图4.1B）。我们统计了各组出现肿瘤的小鼠数量，发现在第10周hucMSC-Ex组较AOM/DSS组成瘤率稍低，而在第7周，仅AOM/DSS组出现肿瘤（图4.1C）。H&E染色结果显示AOM/DSS组小鼠肠绒毛结构严重破坏，hucMSC-Ex组小鼠结直肠组织结构完整性有所恢复（图4.1D）。QRT-PCR显示，AOM/DSS组促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）高表达，而抑炎细胞因子（IL-10）低表达。HucMSC-Ex处理后明显下调了促炎细胞因子的表达，而抑炎细胞因子的表达水平也有所上升（图4.1E）。以上结果表明hucMSC-Ex可以缓解AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎恶性转化过程。图4.1HucMSC-Ex缓解AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎恶性转化过程A.不同时间点小鼠结直肠大体观；B.不同时间点小鼠肿瘤观；C.小鼠肿瘤发生率；D.不同时间点小鼠结直肠组织H&E染色（标尺=100μm）；E.QRT-PCR检测不同时间点小鼠结直肠炎症因子表达情况，**P<0.01;***P<0.001。Figure4.1HucMSC-ExalleviatestheAOM/DSS-inducedmalignanttransformationofcolitisinmiceA.Grossviewofmousecolorectalatdifferenttimepoints;B.Viewofmousetumoratdifferenttimepoints;C.Mousetumorincidence;D.H&Estainingofmousecolorectaltissueatdifferenttimepoints(scale=100μm);E.QRT-PCRtodetecttheexpressionofcolorectalinflammatory
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic value of innate and adaptive immunity in colorectal cancer[J]. Fabio Grizzi,Paolo Bianchi,Alberto Malesci,Luigi Laghi. World Journal of Gastroenterology. 2013(02)
本文编号：3299149
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3299149.html
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