ASIC1a通过介导m 6 A甲基化修饰调控miR-350/SPRY2促进肝纤维化进程

发布时间：2021-07-23 14:55

　　肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）是各种原因引起的慢性肝损害导致的病理过程,是发展为肝硬化甚至肝癌的必要阶段。肝纤维化作为一种可逆的瘢痕修复反应,在其形成过程中适当的干预可阻断甚至逆转肝纤维化。目前认为,肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）的活化增殖在肝纤维化的形成中起关键作用。如何调控HSC的活化增殖是抗肝纤维化重点研究方向。酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels,ASICs）是一类由胞外酸化所激活的阳离子通道,属于ENa C/DEG家族,有四个编码基因编码的七种亚基蛋白:ASIC1a、ASIC1b、ASIC1b2、ASIC2a、ASIC2b、ASIC3和ASIC4。酸敏感离子通道1a（acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a）作为ASICs家族的一员,活化时通道开放,介导Na+、Ca2+等离子的内流,进一步引起机体一系列病理和生理变化。微小RNA（micro RNA,mi RNA）,是一类长约21～25个核苷酸的内源性单链非编码RNA,能通过降解靶基因的m RNA或与靶基因m RNA... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

病人肝脏组织H&E染色、α-SMA和ASIC1a免疫组织化学检测Fig1H&Estaining,α-SMAandASIC1aimmunohistochemistryofthepatient"slivertissue

安徽医科大学硕士学位论文-23-采用CCl4诱导C57BL/6j小鼠制造肝纤维化的动物模型，通过H&E染色和MASSON染色方法观察小鼠肝组织病理学变化，免疫组织化学方法检测肝纤维化的标志性基因α-SMA和目的基因ASIC1a的表达水平的变化。H&E染色和MASSON染色实验结果如图2所示，对照组小鼠肝脏的肝小叶结构正常，肝细胞索排列整齐；CCl4诱导的模型组小鼠肝脏中肝小叶结构混乱，肝细胞索排列异常，有假小叶形成，并且有明显的胶原纤维生成，间质内有明显的炎性浸润情况。免疫组织化学实验检测小鼠肝脏中α-SMA的表达变化，结果显示CCl4诱导的模型组小鼠肝脏中α-SMA的表达水平显著升高。由此提示CCl4诱导的小鼠肝纤维化的动物模型成功。免疫组织化学实验检测小鼠肝脏中ASIC1a的表达变化，结果显示CCl4诱导的模型组小鼠肝脏中ASIC1a的表达相比于对照组明显升高，提示肝纤维化动物模型肝脏中ASIC1a表达水平明显升高。综上所述，CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型的肝组织存在明显的纤维化情况，模型建立成功，并且再肝纤维化小鼠模型中ASIC1a的表达显著升高。图2动物模型肝脏组织H&E染色、MASSON染色、α-SMA和ASIC1a免疫组织化学（n=8）Fig2H&Estaining,MASSONstaining,α-SMAandASIC1aimmunohistochemistryoftheanimal"slivertissue采用血小板衍生因子-BB（PDGF-BB，10ng/mL）诱导大鼠肝星状细胞株HSC-T6建立活化的HSC细胞模型，通过WesternBlot观察α-SMA、Ⅰ型胶原和

安徽医科大学硕士学位论文-24-ASIC1a的蛋白表达水平。结果如图3所示，PDGF刺激活化后，HSC中的α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著上调，提示PDGF活化HSC成功；PDGF刺激活化后，HSC中ASIC1a的蛋白表达水平也显著升高。提示PDGF刺激活化的HSC中的ASIC1a表达也是明显升高的。总之，以上所述结果表明ASIC1a的表达在肝纤维化的发生发展以及HSC活化的过程中均显著升高。图3活化的HSC细胞模型中α-SMA、Ⅰ型胶原和ASIC1a的蛋白表达水平（n=3）Fig3Proteinexpressionlevelsofα-SMA,typeIcollagenandASIC1ainactivatedHSCmodels*P<0.05vs.Controlgroup,**P<0.01vs.Controlgroup.4.2AAV介导的ASIC1a沉默可在体内保护CCl4诱导的肝纤维化采用8型重组腺相关病毒介导的ASIC1a的ShRNA（rAAV8-ASIC1a-ShRNA）在小鼠体内沉默其表达。首先，将小鼠的尾巴用酒精擦拭，以扩张尾静脉血管方便进行重组腺相关病毒的注射。注射完一周后，采用CCl4或等体积的橄榄油进行肝纤维化的动物造模过程。造模结束后，通过对小鼠的新鲜肝脏进行冰冻切片，直接观察重组腺相关病毒所携带的eGFP标签的绿色荧光在肝脏中的富集情况，判断病毒的注射是否成功；通过免疫组织荧光技术观察小鼠肝脏中ASIC1a蛋白的表达水平变化。结果如图4A所示，在rAAV8-ASIC1a-ShRNA组和rAAV8-empty组中，重组腺相关病毒所携带得eGFP标签的绿色荧光都在肝脏中有明显富集，提示rAAV8-ASIC1a-ShRNA注射成功，并成功地代谢到达肝脏部位中。免疫组织荧光实验结果如图4B所示，与对照组相比较，CCl4处理的模型组小鼠肝脏中

【参考文献】：
期刊论文
[1]Changes in skin levels of two neutotrophins （glial cell line derived neurotrohic factor and neurotrophin-3） cause alterations in cutaneous neuron responses to mechanical stimuli[J]. Jeffrey Lawson,Sabrina L.McIlwrath,H.Richard Koerber.  生理学报. 2008(05)



本文编号：3299506