血小板反应蛋白1通过活化转化生长因子β1促进人间皮细胞间皮间叶转化

发布时间：2021-07-30 16:10

　　目的探讨血小板反应蛋白1（TSP-1）对TGF-β1活性的调控在人间皮细胞间皮间叶转化（MMT）中的作用及其机制。方法体外培养人间皮细胞株（Met-5A细胞）,与无血清培养基组（对照组）比较,测定外源性TSP-1刺激下（以5ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1小剂量组,以10ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1大剂量组）Met-5A细胞中TGF-β1的表达和活性,Smad通路活化,以及MMT标志因子纤维连接蛋白（FN）、人Ⅲ型胶原蛋白（CollⅢ）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Snail的表达。同时观察5ng/mL的TSP-1和10\mg/mL的TGF-β1中和抗体刺激下（中和组）Met-5A细胞中Smad通路活化和MMT发生的变化。结果 TSP-1小剂量组和TSP-1大剂量组对Met-5A细胞中TGF-β1表达量和活性的上调作用均呈时间依赖性（P值均<0.05）,但两组间同时间点的差异均无统计学意义（P值均>0.05）。故之后的实验均应用5ng/mL的TSP-1刺激细胞。TSP-1小剂量组在刺激24、48、72h时Met-5A细胞中FN、CollⅢ、Snail和α... 

【文章来源】：上海医学. 2015,38(07)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

图１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同时间Ｍｅｔ－５Ａ细胞中１：刺激０ｍｉｎ时；２：刺激５ｍｉｎ时；３：刺激１０ｍｉｎ时；４：刺激３０ｍｉｎ时；５：刺激６０ｍｉｎ时；６：刺激１２０ｍｉｎ时

蛋白的相对表达量为１．００±０．００，ＴＳＰ－１小剂量组在刺激５、１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ时Ｍｅｔ－５Ａ细胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相对表达量分别为１．０２±０．１６、１．７１±０．２０、２．０２±０．３１、２．９７±０．６５、５．７９±０．５３。１：刺激０ｍｉｎ时；２：刺激５ｍｉｎ时；３：刺激１０ｍｉｎ时；４：刺激３０ｍｉｎ时；５：刺激６０ｍｉｎ时；６：刺激１２０ｍｉｎ时图１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同时间Ｍｅｔ－５Ａ细胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３和Ｓｍａｄ２／３蛋白的变化ＴＳＰ－１小剂量组在刺激１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ时Ｍｅｔ－５Ａ细胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相对表达量均显著高于对照组刺激０ｈ时（Ｐ值均＜０．０５）。２．４ＴＧＦ－β１中和抗体对ＴＳＰ－１诱导的Ｍｅｔ－５Ａ细胞中Ｓｍａｄ通路活化和ＭＭＴ的影响免疫荧光检测结果显示，ＴＳＰ－１刺激Ｍｅｔ－５Ａ细胞可引起Ｓｍａｄ２／３磷酸化并向细胞核内转移（图２，见封底），提示Ｓｍａｄ通路活化。应用中和抗体阻断ＴＧＦ－β１与受体结合，可部分下调ＴＳＰ－１引起的Ｓｍａｄ通路活化，并降低ＴＳＰ－１引起的ＭＭＴ标志因子ｍＲＮＡ表达上调（图２，见封底），提示ＴＳＰ－１通过活化ＴＧＦ－β１／Ｓｍａｄ通路导致ＭＭＴ的发生。ＴＳＰ－１小剂量组在刺激２４、４８、７２ｈ时Ｍｅｔ－５Ａ细胞中的Ｆ

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3311714