内质网相关降解功能缺失导致的肝损伤发生机制与干预措施研究

发布时间：2021-08-08 04:34

　　目的:肝损伤是最常见的肝病类型,被认为是诸多肝病的诱因。目前,引发肝损伤的原因得到了深入的探究,然而触发肝损伤的分子机制尚不明确,治疗方法也很局限。内质网相关降解（Endoplasmic Reticulum-associated deficiency,ERAD）是真核细胞中的一种蛋白质质量控制系统,负责清除未折叠蛋白,恢复细胞稳态,然而ERAD在肝损伤过程中的作用尚不清楚。因此,本研究意在探索ERAD功能缺失在肝损伤发病机理中的作用,并探讨Mg2+在预防肝损伤中的潜在作用。方法:1、利用CRISPR-Cas9技术构建ERAD功能缺失的HepG2细胞。2、通过对正常小鼠和ERAD功能缺失小鼠的血浆生化指标和组织切片分析,检测小鼠肝损伤情况。3、利用Western blot和Co-IP技术分析ERAD功能缺失的HepG2细胞中未折叠蛋白的降解及聚集情况。4、通过油红O染色分析ERAD功能缺失的HepG2细胞中脂肪代谢情况。5、通过Mg2+干预,检测ERAD功能缺失的HepG2细胞相对细胞活力的变化。结果:1、ERAD功能缺失的HepG2细胞和小鼠模型构建成功。2、ERAD功能缺失导致小鼠发... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．?ＥＲＡＤ功能缺失的小鼠肝损伤情况检测

实验结果分析?内质网相关降解功能缺失导致的肝损伤发生机制与干预措施研宄??进行计算，并利用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ软件绘制变化曲线，结果显示（图３．Ａ－Ｄ），??在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏ丨组细胞中，加入ＣＨＸ抑制蛋白合成后，未折叠蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ??蛋白的降解不受抑制，随着ＣＨＸ加入时间的延长，ＮＨＫ－ＧＦＰ蛋白在细胞中的??量会越来越少，说明在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ细胞中未折叠蛋白降解正常。然而ＨｅｐＧ２??Ｈｒｃｉｌ?Ｋ０细胞和ＨｅｐＧ２?ＳｅｌｌＬ?Ｋ０细胞在蛋白质合成受到抑制的情况下，未折叠??蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ的降解也存在障碍，并不会随ＣＨＸ加入时间的延长而使细胞中??聚集的未折叠蛋白发生明显的变化，这样就会导致大量的未折叠蛋白聚集在内质??网中，影响细胞功能，使得内质网中蛋白过载，进一步加强ＥＲＳ。??Ａ?ＨｅｐＧ２ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＳＳＳｅＭＬＫＯ?＾?＾ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ＇ＧＦＰ?Ｊ?？?Ｍ?０?？?９０?ＣＨＸ（ｍｉｎ）?１＇°１＾?－?ＨｅｐＧ２Ｓｅｌ１ＬＫＯ????Ｃ?????ｊ：??ｐ－ａｃｔｉｎ?°＇５ｉ—Ｓ－？?Ｔｏｏ??ＣＨＸ?ｃｈａｓｅ（ｍｔｎ）??Ｃ?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＧ２?Ｈｒｄｌ?ＫＯ?Ｄ?１２?？?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ－６ＦＰ?＋?＋?＋?＋?＋?￣ＨｅｐＧ２Ｈｒｄ１ＫＯ??０?４５?９０?０?４５?９０?ＣＨＸ?Ｃｈａｓｅ（ｍｉｎ）?ｉ??—??—??１１－°－?——■??ＮＨＫ－６ＦＰ?＿ｉ?麵》■？?＿§?爾．７３ｋＤ?｜?０．９．????ｓ?０８．??Ｍｃｔｉｎ?ｍｍ?４３ｋＤ?

图４．?ＥＲＡＤ?

【参考文献】：
期刊论文
[1]Apoptosis and non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Tatsuo Kanda,Shunichi Matsuoka,Motomi Yamazaki,Toshikatsu Shibata,Kazushige Nirei,Hiroshi Takahashi,Tomohiro Kaneko,Mariko Fujisawa,Teruhisa Higuchi,Hitomi Nakamura,Naoki Matsumoto,Hiroaki Yamagami,Masahiro Ogawa,Hiroo Imazu,Kazumichi Kuroda,Mitsuhiko Moriyama.  World Journal of Gastroenterology. 2018(25)



本文编号：3329236