脂肪细胞共培养对HepG2细胞表达AQP9的影响及机制探讨
发布时间：2021-08-10 16:41
目的:建立脂肪细胞与肝细胞共培养模型,观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9（aquaporin9,AQP9）表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:首先,培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟,将Hep G2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48h,分别标记为对照组及实验组。对共培养的Hep G2细胞进行油红O染色及细胞内甘油三酯（triglyceride,TG）含量检测,同时检测磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）-丝苏氨酸蛋白激酶（serine-threonine kinase,Akt）信号通路变化及AQP9 m RNA和蛋白水平变化情况。随后,实验组在共培养的同时加入100ng/ml PI3K-Akt通路激动剂重组人胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）,标记为实验组+IGF-1组,WB验证PI3K-Akt通路的激活,同时q RT-PCR和WB检测AQP9的表达变化。其次,通过重组慢病毒转染技术将Hep G2细胞进行重组慢病毒LV-AQP9或...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：34 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成熟脂肪细胞鉴定（×100）
图 3 PI3K-Akt 通路激动剂 IGF-1 可激活 PI3K-Akt 信号通路及下调 AQP9 的表达A：qRT-PCR 检测 HepG2 细胞中 AQP9 mRNA 表达；B：WB 检测 HepG2 细胞中 AQP9、p-Akt、Akt 蛋白表达。a与实验组比较 P<0.05Fig.3 PI3K-Akt pathway agonist IGF-1 can activate PI3K-Akt signaling pathwayand down-regulate the expression of AQP9A:qRT-PCR detected the expression of AQP9 mRNA in HepG2 cells;B:WB detected the expression of AQPp-Akt andAkt proteins in HepG2 cells.aCompared with the experimental group P<0.052.5 成功构建稳定过表达 AQP9 的 HepG2 细胞激光共聚焦显微镜下观察两组转染细胞发现（图 4A），转染效率均>90%，HepG2-PWPI 组荧光图片整个细胞表达强的绿色荧光[图 4A（b）]，而 HepG2-AQP9组荧光图片可见绿色荧光主要分布在 HepG2-AQP9 细胞膜上[图 4A（d）]。qRT-PC（图 4B）和 WB（图 4C）结果均提示 HepG2-AQP9 组中 AQP9 的 mRNA 和蛋白表达显著高于 HepG2-PWPI 组（P 值分别为 0.002、0.000），提示稳定过表达 AQP9 细胞
图 4 构建获得稳定过表达 AQP9 的 HepG2 细胞及过表达 AQP9 可促进脂肪细胞共培养的 HepG2 细胞发生脂肪变A：激光共聚焦检测 HepG2 细胞绿色荧光蛋白表达量（×200）（a：HepG2-PWPI 组白片，b：HepG2-PWPI 组光图片，c：HepG2-AQP9 组白片，d：HepG2-AQP9 组荧光图片）；B：qRT-PCR 检测稳定感染病毒的 HepG2胞中 AQP9 mRNA 的表达；C：WB 检测稳定感染病毒的 HepG2 细胞中 AQP9 蛋白的表达；D：HepG2-PWPI 共培组、HepG2-AQP9 共培养组细胞油红 O 染色（×100），并检测细胞内甘油三酯含量。a与 HepG2-PWPI 组比P<0.05；b与 HepG2-PWPI 共培养组比较 P<0.05Fig.4 Construction of stable over-expression of AQP9 in HepG2 cells and over-expression of AQP9 canpromote steatosis in HepG2 cells co-cultured of adipocytesA: The expression of green fluorescent protein in HepG2 cells was detected by Laser confoca200)(a:HepG2-PWPI group white pictures,b:HepG2-PWPI group fluorescent pictures,c:HepG2-AQP9 growhite pictures,d: HepG2-AQP9 group fluorescent pictures ).B:qRT-PCR detected the expression of AQmRNA in HepG2 cells stably infected with virus;C:WB detected the expression of AQP9 protein in Hepcells stably infected with virus;D: The cells of HepG2-PWPI co-culture group and HepG2-AQP9 co-cultgroup were stained with oil red O (x100), and the contents of triglycerides were detected.acompared wHepG2-PWPI group P<0.05;bcompared with HepG2-PWPI co-culture group P<0.052.7 PI3K-Akt 通路激动剂 IGF-1 可激活 PI3K-Akt 信号通路及下
【参考文献】：
期刊论文
[1]水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及意义[J]. 邱烈旺,顾陆昀,吕琳,王奎,梅浙川. 第三军医大学学报. 2012(07)
[2]叉头转录因子1基因沉默对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响[J]. 肖潇,梅浙川,邱烈旺,刘卉,吕琳. 中国生物制品学杂志. 2011(10)
本文编号：3334418
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：34 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成熟脂肪细胞鉴定（×100）
图 3 PI3K-Akt 通路激动剂 IGF-1 可激活 PI3K-Akt 信号通路及下调 AQP9 的表达A：qRT-PCR 检测 HepG2 细胞中 AQP9 mRNA 表达；B：WB 检测 HepG2 细胞中 AQP9、p-Akt、Akt 蛋白表达。a与实验组比较 P<0.05Fig.3 PI3K-Akt pathway agonist IGF-1 can activate PI3K-Akt signaling pathwayand down-regulate the expression of AQP9A:qRT-PCR detected the expression of AQP9 mRNA in HepG2 cells;B:WB detected the expression of AQPp-Akt andAkt proteins in HepG2 cells.aCompared with the experimental group P<0.052.5 成功构建稳定过表达 AQP9 的 HepG2 细胞激光共聚焦显微镜下观察两组转染细胞发现（图 4A），转染效率均>90%，HepG2-PWPI 组荧光图片整个细胞表达强的绿色荧光[图 4A（b）]，而 HepG2-AQP9组荧光图片可见绿色荧光主要分布在 HepG2-AQP9 细胞膜上[图 4A（d）]。qRT-PC（图 4B）和 WB（图 4C）结果均提示 HepG2-AQP9 组中 AQP9 的 mRNA 和蛋白表达显著高于 HepG2-PWPI 组（P 值分别为 0.002、0.000），提示稳定过表达 AQP9 细胞
图 4 构建获得稳定过表达 AQP9 的 HepG2 细胞及过表达 AQP9 可促进脂肪细胞共培养的 HepG2 细胞发生脂肪变A：激光共聚焦检测 HepG2 细胞绿色荧光蛋白表达量（×200）（a：HepG2-PWPI 组白片，b：HepG2-PWPI 组光图片，c：HepG2-AQP9 组白片，d：HepG2-AQP9 组荧光图片）；B：qRT-PCR 检测稳定感染病毒的 HepG2胞中 AQP9 mRNA 的表达；C：WB 检测稳定感染病毒的 HepG2 细胞中 AQP9 蛋白的表达；D：HepG2-PWPI 共培组、HepG2-AQP9 共培养组细胞油红 O 染色（×100），并检测细胞内甘油三酯含量。a与 HepG2-PWPI 组比P<0.05；b与 HepG2-PWPI 共培养组比较 P<0.05Fig.4 Construction of stable over-expression of AQP9 in HepG2 cells and over-expression of AQP9 canpromote steatosis in HepG2 cells co-cultured of adipocytesA: The expression of green fluorescent protein in HepG2 cells was detected by Laser confoca200)(a:HepG2-PWPI group white pictures,b:HepG2-PWPI group fluorescent pictures,c:HepG2-AQP9 growhite pictures,d: HepG2-AQP9 group fluorescent pictures ).B:qRT-PCR detected the expression of AQmRNA in HepG2 cells stably infected with virus;C:WB detected the expression of AQP9 protein in Hepcells stably infected with virus;D: The cells of HepG2-PWPI co-culture group and HepG2-AQP9 co-cultgroup were stained with oil red O (x100), and the contents of triglycerides were detected.acompared wHepG2-PWPI group P<0.05;bcompared with HepG2-PWPI co-culture group P<0.052.7 PI3K-Akt 通路激动剂 IGF-1 可激活 PI3K-Akt 信号通路及下
【参考文献】：
期刊论文
[1]水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及意义[J]. 邱烈旺,顾陆昀,吕琳,王奎,梅浙川. 第三军医大学学报. 2012(07)
[2]叉头转录因子1基因沉默对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响[J]. 肖潇,梅浙川,邱烈旺,刘卉,吕琳. 中国生物制品学杂志. 2011(10)
本文编号：3334418
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